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黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。
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不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的:
① 与细胞竞争性生长,对细胞生长有不利影响。
② “黑胶虫”会增殖,增殖多时,视野下一大片都为“黑胶虫”。
③ “黑胶虫”与血清有关,与血清质量有很大关系。
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2、目前对“黑胶虫”的定论:有2种解释:
**,黑胶虫为生物。
它是小于细菌的生物,直径小于0.1μm,大多国外血清中多见,可能是国外牛血清中含有的某种原虫。只要它是生物,那么在培养基中一定会对细胞有影响。
**,黑胶虫不是生物。
国内的血清中,通常灭活之后都会有絮状沉淀出现,而黑胶虫出现时,所使用的血清被反复冻融过多次。所以推测,所谓的“黑胶虫”其实就是血清中的某些蛋白成分的物质,经过灭活之后丧失活性,在培养基中,镜检见到的运动其实是这些物质在溶液中做“布朗运动”。随着细胞消耗培养基,这些物质越来越多,*后细胞所用的营养消耗完,细胞容易死亡。
![](http://zt.yzimgs.com/ComFolder/645604/image/201609/201609271515010541.jpg)
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1.换好一点的血清(我觉着和血清的关系不大)。
2.如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解。若是悬浮的话,就不太好处理拉,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞,这种细胞不分裂,过一阵就死掉了,做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度。
3.换用进口的一次性塑料培养瓶。
4.建议清理无菌室所有物品,重新灭菌,用KMnO4熏蒸,按**使用无菌室做,细胞重新复苏,。
5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响。
6.有材料称minocycline具有一定的作用,可以和换液结合起来使用。
7.可以用专门的杀黑胶虫培养基。
小牛血清 Gibco血清产品中文名称 货号 英文名称 规格 供应商
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小牛血清 Gibco马血清,热灭活 26050-070/26050-088 Horse Serum, Heat-Inactivated 100ml/500ml GIBCO
小牛血清 Gibco牛血清 16170-086/16170-078/16170-060 Bovine Serum 100ml/500ml/1000ml GIBCO
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小牛血清 Gibco胎牛血清,MSC优级(美国农业部批准) 12662-029 Fetal Bovine Serum, MSC-Qualified (USDA Approved) 500ml GIBCO
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小牛血清 Gibco胎牛血清,优级 26140-087/26140-079/26140-095 Fetal Bovine Serum, Qualified 100ml/500ml/1000ml GIBCO
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