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中药活性筛选与活性追踪实验

发布时间：2018-06-13

DPPH法

实验方法原理	DPPH (2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基，2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一种比较稳定的脂性自由基，其N上有一个游离电子，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm处有大的吸收峰。加入抗氧化剂以后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，紫色褪去，变为无色物质，在517 nm处的吸收消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。依此原理用分光光度计检测DPPH自由基与试样液反应后吸光值的变化，可检定试样提供氢原子、*自由基抗氧化的能力。该法简便易行，灵敏可靠，不失为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一。
实验材料	虎杖厚朴黄芩地榆前胡绞股蓝麦冬葛根菊花白芍
试剂、试剂盒	DPPH无水乙醇二甲基亚砜维生素C
仪器、耗材	圆底烧瓶旋转蒸发仪真空干燥机酶标板酶标仪
实验步骤	1. 中药材选择：学生自选4种药材备选药材：虎杖、厚朴、黄芩、地榆、前胡、绞股蓝、麦冬、葛根、菊花、白芍 2. 中药提取分别将适当切碎的中药材20 g放入250 ml圆底烧瓶中，各加入10倍量乙醇，回流提取1次，过滤后提取液用旋转蒸发仪浓缩，并用真空干燥机干燥，备用。 3. 试剂的配制 DPPH溶液：称取3.2 mg DPPH溶解于40 ml无水乙醇中，摇匀，备用。提取物溶液：用二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液，备用。测定时稀释成相应浓度。维生素C溶液：DMSO作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂，备用。 4. 活xing药材筛选取10 μL的样品溶液放入酶标板中，再加入90 μL的DPPH溶液，以维生素C溶液做阳性对照，以DPPH溶液作为标准，样品溶液为空白，室温放置30 min后，酶标仪517 nm测定，利用以下公式计算各种样品的**率(k)，每个样品测定2次(按下图所示加样)。 k = [ 1 - (A_e - A₀ ) ] /(A_D - A_D0) ×100 % 式中： A_e -- DPPH + 提取物混合溶液的吸光度 A₀ -- 提取物溶液的吸光度 A_D -- DPPH溶液的吸光度 A_D0 -- DMSO+乙醇的吸光度 5. 活行药材的活性成分追踪自主设计实验，对通过上述活性筛选出的活性zui好的药材，进行提取和分离，对不同的流份进行进一步的活性追踪评价。

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