全长鸟枪法测序技术服务|实验技术服务

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测序实验流程：
基因测序的方法 是在获得一定的遗传及物理图谱信息的基础上，绕过bac克隆逐个排序的过程，将基因组dna分解成2kb左右的小片段进行随机测序，辅以一定数量的10kb的克隆和bac克隆的末端测序，利用超级计算机进行整合进行序列组装。
系将大片段DNA(如噬菌体文库中约40 kb长或细菌人工染色体所含350 kb长的DNA插入片段)随机切成许多1～1.5 kb的小片段，分别对其测序，然后借助序列重叠区域拼接成全段序列。
优点是速度快，简单易行，成本较低。但用它来测序，*终排序结果的拼接组装不太容易。
全基因组鸟枪法测序的主要步骤是：
**，建立高度随机、插入片段大小为1.6kb到4kb左右的基因组文库。克隆数要达到一定数量，即经过两端测序的克隆片段的碱基总数应达到基因组大小的6到10倍。
**，高效、大规模的克隆双向测序。
第三，序列组装。借助Phred, Phrap, Consed 软件进行序列组装，产生一定数量的contig。
第四，填补缺口。有两种待填补的缺口，一是没有相应模板DNA的物理缺口，我们通过PCR的方法进行填补；二是有模板DNA但未测到的序列缺口，我们直接在模板DNA上设计引物测序。
鸟枪法测序适用范围：BAC、Fosmid、cosmid、线粒体DNA、叶绿体DNA等。
大致步骤
1.使用限制性内切酶将带有目的基因的DNA链切成若干小段。
2.再使用DNA连接酶将其整合到载体的基因中,并使其表达。
3.如果在某个细胞中得到了目的产物,就说明整合到该细胞中的DNA片段就是所需要的DNA片段。
鸟枪法测序的缺点
随着所测基因组总量增大，所需测序的片段大量增加，各个片段重叠或一个连续体的概率是2n2-2n
高等真核生物（如人类）基因组中有大量重复序列，导致判断失误。