非编码RNA:microRNA和lncRNA检测
非编码RNA是指不编码蛋白质的RNA,因其异常表达而与许多**发生密切相关,在**、**、哺乳动物等许多生物体的生命活动中发挥着极广泛的调控作用, 因此受到研究者的重视并成为热点研究领域。
目前用于非编码RNA研究的主要方法有转录组测序、Northern 印迹、实时荧光定量PCR技术、荧光原位杂交、RNA 干扰和 RNA 结合蛋白**沉淀等,而荧光定量PCR方法作为检测非编码RNA表达的金标准,其应用更是广泛。
关于microRNA
1.microRNA发现
1993年Lee等在秀丽新小杆线虫内**发现非编码蛋白质但能时序调控其胚胎后期发育基因表达的小分子RNA:lin-4。2000年Reinhart等在对线虫的发育调控研究中发现**种miRNA:Let-7,接着人们相继在**、果蝇、线虫、斑马鱼、动植物与人体内发现大量的miRNA编码基因,进一步研究证实MicroRNA主要通过调控其靶基因mRNA在转录后水平调控蛋白表达,*新有报道microRNA也能在转录水平调控基因表达。
2.microRNA作用机制
在细胞核内,由DNA转录生成pri-pre-microRNA被Drosha酶切割pri-pre-miRNA成形成长度大约70-100碱基的、具发夹结构的pre-microRNA。该前体RNA经核输出蛋白转运到细胞质,经Dicer酶切割形成成熟的miRNAs。成熟miRNA主要是以RISC(RNA-induced silencing complex)复合体形式结合于靶mRNA而发挥基因表达调控作用。
3.microRNA应用与检测
由于microRNA在众多程序的调控,诸如生物发育、细胞增殖和凋亡以及近来被证明与肿瘤发生相关等领域发挥作用,因此其鉴定和定性研究成为迅速发展的一大研究领域;
4. microRNA检测流程--高通量荧光定量PCR法
启因生物利用荧光定量PCR的方法,建立了人/鼠microRNA检测的数据库,目前能提供500多种microRNA检测;并且开发了microRNA检测芯片,提供microRNA大规模筛选检测技术服务。
官网:www.wcgene.com 电话: 邮箱:zhang@wcgene.com
附:microRNA qPCR芯片(肿瘤芯片,96孔板)
microRNA qPCR芯片(384孔板芯片)
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