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企业信息
第8年
- 入驻时间: 2014-08-19
- 联系人:业务代表
- 电话:400-968-7988
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联系时,请说明易展网看到的
- Email:fuwu@bioleaf.com
文章详情
滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务
日期:2024-08-30 22:05
浏览次数:207
摘要:关键词:滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务
简介:世界****滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序...
关键词:滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务
简介:世界****滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
一、实验材料准备
1. 滑膜组织:将外科手术切下的组织在手术台上请将标本放入低温生理盐水中,在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2. 试剂:4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM配制),培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
3. 器械:手术器械。
二、方法
1. 将切下的组织在手术台上请将标本放入低温生理盐水中(静止),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2. 在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤。
3. 获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞),放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎。
4. 用双倍获得组织的体积含有4 mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次)
5. 30分钟后收集**管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟,上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织,继续用于消化。
6. 离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转,离心6分钟,*后一次用记数板观察到有细胞。细胞*终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接种到培养瓶中培养。
7. 60钟后收集**管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000 rpm离心6分钟;用α-MEM洗2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000 rpm离心6分钟,*后一次用记数板观察细胞并计数。细胞*终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接种到培养瓶中培养。
8. 必要时可做第三管细胞收集;并立即作原代滑膜细胞培养。
9. 每2-3天换液一次。
实验材料:
1. 实验动物:大鼠、兔,人手术切除的关节等;
2. 清洗液:不含Ca2+ 和Mg 2+ 的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100µg/ml链霉素,pH7.2;
3. 培养液:RPMI1640培养基,补加15%小牛血清;
实验方法:
1. 将大鼠处死后,用75%酒精消毒;
2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉,暴露长骨两端的关节,取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中;
3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织,用缓冲液洗2—3次;
4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中,剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块;
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶,使植有组织块的一面朝上,加入培养液,盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养;
6. 培养4h后,组织块较牢黏附于瓶底时,再轻轻反转培养瓶,继续培养;
7. 培养3d后换培养液。
注意事项
1. 用0.25% trypsin或0.25% trypsin+ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化细胞或合用,只有单用collagenaseⅠ有用、*好;
2. 机械法很难获得细胞;
3. 全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,加10%胎牛血清。不能用小牛血清,胎牛血清用国产即可;
4. 必须用Ca2+-free的PBS。
简介:世界****滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务原装**,质量保证,价格优惠。
滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信,我们提供原始的表达菌株和克隆质粒,客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌:滑膜细胞原代培养服务|实验技术服务 http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程:
一、实验材料准备
1. 滑膜组织:将外科手术切下的组织在手术台上请将标本放入低温生理盐水中,在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2. 试剂:4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM配制),培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
3. 器械:手术器械。
二、方法
1. 将切下的组织在手术台上请将标本放入低温生理盐水中(静止),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
2. 在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤。
3. 获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞),放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎。
4. 用双倍获得组织的体积含有4 mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120分钟(在此期间震动混匀数次)
5. 30分钟后收集**管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000转离心6分钟,上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织,继续用于消化。
6. 离心管底细胞用α-MEM离心洗涤2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000转,离心6分钟,*后一次用记数板观察到有细胞。细胞*终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM中,接种到培养瓶中培养。
7. 60钟后收集**管细胞:细胞悬液经70 μm细胞滤网过滤,用1500-2000 rpm离心6分钟;用α-MEM洗2次,每次用α-MEM重悬浮后用1500-2000 rpm离心6分钟,*后一次用记数板观察细胞并计数。细胞*终悬浮于α-MEM含有10%胎牛血清中,接种到培养瓶中培养。
8. 必要时可做第三管细胞收集;并立即作原代滑膜细胞培养。
9. 每2-3天换液一次。
实验材料:
1. 实验动物:大鼠、兔,人手术切除的关节等;
2. 清洗液:不含Ca2+ 和Mg 2+ 的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100µg/ml链霉素,pH7.2;
3. 培养液:RPMI1640培养基,补加15%小牛血清;
实验方法:
1. 将大鼠处死后,用75%酒精消毒;
2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉,暴露长骨两端的关节,取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中;
3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织,用缓冲液洗2—3次;
4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中,剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块;
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶,使植有组织块的一面朝上,加入培养液,盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养;
6. 培养4h后,组织块较牢黏附于瓶底时,再轻轻反转培养瓶,继续培养;
7. 培养3d后换培养液。
注意事项
1. 用0.25% trypsin或0.25% trypsin+ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化细胞或合用,只有单用collagenaseⅠ有用、*好;
2. 机械法很难获得细胞;
3. 全培用α-MEM或RPMI1640或DMEM,加10%胎牛血清。不能用小牛血清,胎牛血清用国产即可;
4. 必须用Ca2+-free的PBS。