这一回我们来瞧瞧NEB公司这几年推出了哪些PCR酶新品吧。NEB真不愧为老牌的酶类产品供应商,各种各样的酶,那可不是一般的多。登陆它的网站,光是聚合酶,就有整整一大页,常规PCR、快速PCR、长距离PCR、高保真PCR、多重PCR,每个子目录下都有一长串产品。幸亏小编找到了PCR聚合酶选择表,上面清楚地列出了保真度、片段长度、延伸速率、外切酶活性等各项参数,否则三天三夜也搞不清楚。
比你想象的更长
大家也许还对去年生物通首页上的长颈鹿广告记忆犹新吧,一只可爱的长颈鹿高耸云端,“比您想象的更长”,这就是NEB的LongAmp? DNA聚合酶。LongAmp? DNA聚合酶是一种新型混合酶,混合有 NEB高品质 Taq和广受欢迎的高保真聚合酶 Deep Vent,因而既具有 Taq酶的高扩增能力,也具有 Deep Vent的高保真性,是扩增长片段 DNA的优选酶。
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至于到底有多长,lambda DNA可扩增至40kb,基因组DNA可扩增至30 kb。因为含有高保真聚合酶Deep Vent,所以保真度是Taq酶的2倍。延伸速率也比普通的Taq酶略高,达1.2kb/min。提醒一下,由于是混合酶,PCR产物则部分是带A尾巴的,部分是平末端的。如果下一步要转到TA克隆,有必要进行加A操作。
无可挑剔的PhusionII代
Phusion? II热启动超保真 DNA聚合酶是去年底才推出的新品,由Finnzymes公司开发和生产,NEB来销售。它秉承了Phusion系列DNA聚合酶的超保真度,错配率比Taq 低 50 倍,比 Pfu 低 6 倍,是目前市场上保真度*高的热稳定聚合酶之一。而且它合成 DNA的速度是以往任何单一酶都难以实现的,即使是*复杂的模板,也能准确、快速地完成反应。每 kb 碱基的延伸时间低至 15-30秒。
在常温下,Phusion? II热启动超保真 DNA聚合酶与一种Affibody?分子可逆结合,因而失活。PCR循环开始后,酶立刻重新激活。升级版的II代Phusion? 热启动超保真DNA聚合酶所使用的Affibody分子对退火步骤的温度没有限制,因此允许使用的引物更宽了,包括那些熔解温度低的引物。这种酶还对PCR抑制剂有着高耐受性,让您所需的优化极少。
超保真+速度快+热启动+20kb的扩增子长度,真是一种无可挑剔的DNA聚合酶。无论您的要求多么苛刻,相信它都能满足。
快,快,快!
近年来,PCR的一个趋势就是快,不求*快,只求更快。无论是仪器还是酶,都在朝这方面努力。仪器的升降温更快了,酶的延伸速率更高了。此外,研究人员还另辟蹊径,尽量去除不必要的步骤,譬如不提取DNA,而是直接从细胞或组织中扩增目的片段。这样不仅能节省时间和试剂,还能*大程度地避免污染。然而,从血液或组织中直接扩增DNA也是颇具挑战性的,因为样品中存在抑制剂。NEB也顺应潮流,开发出几种具有此功能的聚合酶和试剂盒。
Hemo KlenTaq?就是其中的一例。从名字可以大致猜出,它适用的样品是血液。Hemo KlenTaq是截短后的Taq DNA 聚合酶,它缺失了 N 端的280 个氨基酸。HemoKlenTaq还具有其它突变,这些突变使它能够耐受全血中存在的抑制剂。因此,它能够耐受高达10%的全血。无需事先提纯,HemoKlenTaq也能够扩增人和小鼠全血样品中的 DNA。在大多数抗凝剂存在的情况下依然表现良好,包括肝素、柠檬酸和EDTA。
同时,Phusion? 血源 PCR 试剂盒也是为全血中DNA的扩增而设计的。它在 PCR 前无需纯化 DNA。试剂盒中含有经过改造的 Phusion 热启动超保真 DNA聚合酶,适合保真度要求高的实验。此酶掺入率高,聚合能力强,能够耐受血液中存在的抑制剂,甚至当血液浓度高达 40%时依然保持活性。Phusion 血源 PCR试剂盒能够对含有不同抗凝剂、贮存于不同条件下以及不同来源的血液样品进行分析,它还能够分析滤纸上的血液样品。
以上介绍了NEB的一些新品,它的PCR聚合酶远不止以上几种。为了避免您被NEB庞大的聚合酶家族吓到,小编特意贴上了PCR聚合酶选择指南,方便您根据实际应用来选择。如果您仍是一筹莫展,请点击此处留言,NEB的技术人员会与您联系。