如何快速准确地滴定杆状病毒？

杆状病毒的滴定过去常采用空斑分析，不过此方法耗时约1个星期，实在是有些漫长。为此，Clontech公司推出了BacPAK? qPCR Titration Kit，作为空斑分析的替代，来快速准确地滴定AcMNPV类型的杆状病毒。

此试剂盒采用快速的DNA纯化步骤，并利用qPCR和SYBRGreen检测来确定病毒DNA基因组的含量。由于qPCR滴定非常快速，目的细胞的感染和病毒粒子的收获就可在同**进行，也就避免了反复冻融对病毒感染效率的影响。这种方法能够让你以已知的感染复数（MOI）感染细胞，从而获得更准确、一致的结果。

以往，耗时的滴定方法、延长的病毒储存时间和反复冻融都影响了病毒储存液的感染效力，研究人员在若干天后获得的只是感染力和MOI的近似值。qPCR滴定方法比空斑分析要快得多（详见下表），因此在收获病毒粒子的当天就能感染目的细胞。这样快速的周转*大限度地保持了病毒活力。

表1. BacPAK qPCRTitration Kit与其他滴定方法的比较

BacPAK qPCR TitrationKit的操作过程如下：收集病毒上清，利用病毒DNA纯化试剂盒从少量上清中提取基因组DNA。将病毒DNA样品连续稀释，进行定量PCR，来确定每个浓度的Ct值，再根据对照模板的标准曲线计算出样品中的DNA基因组拷贝数。

一旦基因组拷贝数确定，它就能与病毒感染力相关联，从而确定拷贝数/PFU的关系。这个比例的确定能让你标准化每次实验所使用的样品量，得到更为一致的分析间结果。

介于其简单、重复性好、处理时间短，BacPAK qPCRTitration Kit成为确定杆状病毒滴度的理想选择。另外，Clontech还提供了BacPAK Rapid TiterKit，利用AcMNPV衣壳蛋白Gp64的抗体对病毒感染过的细胞进行**染色。此过程虽不如定量PCR那么快，但也比空斑分析快很多，且结果较为直观。