PyroMark Q24 焦磷酸测序仪采用成熟的焦磷酸测序技术,在遗传分析和表观遗传的甲基化研究中进行基于序列的实时检测和定量,独特的PyroMark系统仅需数分钟即可提供可靠的定量和测序结果。PyroMark Q24是集测序、样品制备、试剂和对照以及完整和灵活的软件于一体的系统,非常适用于二、三和四等位基因突变以及连续CpG位点分析及定量。相比于Sanger测序需在测序前进行耗时的PCR产物克隆,PyroMark Q24则在15分钟的时间内可完成1-24个样品的序列分析及高度准确的定量。
原理和功能:
1、PyroMark Q24 序列分析仪:利用亚硫酸氢盐法和焦磷酸测序——其原理是根据所有未甲基化的C经亚硫酸氢盐处理和PCR之后全部转化成T,然后通过焦磷酸测序,对比处理和未处理的PCR产物来确定DNA的甲基化情况。PyroMark Q24在甲基化试验中能**定量单个CpG位点,能够在混合的细胞群体中定量常见和稀有突变以及等位基因频率,且甲基化分析和SNP分型可整合在一次实验中完成。
2、PyroMark Q24 真空工作站:用于制备单链DNA——从PCR产物到测序即用的单链模板,利用PyroMark Q24真空工作站可在15分钟内平行处理多至24个样品且可靠的流程有助于避免样品批次间的DNA交叉污染。在工作站中生物素标记的PCR产物与链霉素亲和素包被的树脂微珠相结合,微珠随后被Vavuum Prep Tool捕获并彻底清洗,产生适合测序的单链DNA。
3.PyroMark Q24 软件:安装在PC上的此款软件可对同一块板上的样品采用两种模式进行分析——CpG和AQ(等位基因定量),AQ模式可分析单个和多变位点以及二重、三重和四重等位基因突变,CpG模式可分析多个连续的CpG位点并提供了亚硫酸氢盐处理的内置参照。利用设计软件可以对引物进行设计,使其中一条引物带上生物素标记以利于生成的PCR产物在样品制备时被固定在微珠上。此外,软件还提供了参考序列模式,给出包括预计峰位置和预计峰高度的信息,运行之后,根据此信息对单个位点以及序列背景进行质量评估。
产品应用:
通过亚硫酸氢盐处理和焦磷酸测序进行甲基化程度和等位基因频率分析,发现稀有突变和CpG位点以及SNP分型,是表观遗传学和癌症研究的有力工具。