影响免疫组化染色的因素

良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。需要病理技术员和病理医生密切配合、相互协调、共同努力才能做出合格的免疫组化切片。

1、标本的固定

手术标本的及时固定是免疫组化染色质量的关键。未能及时固定的组织，会造成细胞的变性和自溶，导致结构的破坏和抗原物质的弥散，在免疫组化染色上表现为抗原定位的变化和背景染色的增高。过度的固定会造成抗原决定簇的封闭和抗原的丢失。

同一病例的ER表达情况

固定二周后取材                固定8小时后取材      

未及时固定的乳腺癌组织ER表达胞浆着色

2、切片质量的影响

切片太厚、皱褶，刀痕，敷贴不牢固，以及脱蜡不，均会影响免疫组化的染色质量，易出现非特异性染色和染色不均匀。

3、抗原修复环节的影响

抗原修复环节在免疫组化染色中是重要的环节。不同的修复时间、不同的修复方法、不同的抗原修复液，终的结果会有差异。

同一蜡块不同修复方式的结果Her-2(2+)

         微波修复                                                       水浴修复

同一蜡块不同修复时间的结果

同一蜡块使用不同修复液的结果Ki-67

                                 EDTA                                    柠檬酸

4、操作过程中细节问题的影响

滴加抗体未覆盖组织，PBS残留过多，操作过程中切片干燥等原因，会出现边缘效应和染色不均匀及北京染色等。

抗体覆盖组织不造成的边缘效应

抗体覆盖不均匀的灶状着色

5、抗体、检测系统的影响

使用不同克隆、不同种属来源的抗体，不同的检测系统，免疫组化的染色会产生差异。

使用三步法试剂盒（如SP法）生物素系统进行免疫组化染色时，如果操作不当会产生较强的背景染色。

6、显色剂、复染剂的影响

不同的DAB显色试剂盒、不同的显色时间，会对免疫组化染色强度及级别判断产生影响。苏木素复染过深、过浅，对比都不清晰。

DAB显色恰当GST-π

DAB显色适当，苏木素复染过浅