1、标本在离体后应立即浸泡于相当于标本体积8~10倍的标准固定液中,大标本要剖开固定。离体后标本固定前存放不得超过30分钟。
2、在实际工作中,就可操作性而言,10%的缓冲福尔马林是兼顾保存组织形态和抗原性通行的、被广泛接受的选择。
3、适度、适时的固定。一般而言,大标本只要做到及时切开固定,在室温下12小时即可达到固定要求;为了适应免疫组化染色标准化的需要,标本固定后应及时取材,通常固定时间不得超过24小时。
4、达到固定时间要求而不能及时进入脱水程序的标本,建议将标本置入70%的乙醇中进行暂时保存直至进入组织脱水程序。
脱水及制片
1、建立严格的组织脱水试剂规范化更换制度,组织处理质量。
2、切片厚度一般3~4µm,厚薄均匀、平整,无刀痕、折叠,采用高质量防脱载玻片。
3、切片在60℃烤箱内烤2~3小时,或者70 ℃烤箱内1小时。
4、脱蜡要和常规切片分开,使用单独的二甲苯,如果温度过低或二甲苯使用次数较多,可适当延长脱蜡时间。
二、抗原修复
抗原修复的方式有多种,热修复一般推荐高压锅热修复法,但是微波修复也有其方便的一面。影响抗原修复的基本因素是加热的温度和加热的时间,以及所使用的修复液的PH值。需要操作者在实际工作中摸索总结,同时要根据每种抗体的具体要求,找到较适合的修复方式。抗原修复的恰当与否,直接关系到免疫组织化学染色的成败,进一步影响后结果的正确判读。
三、抗体及检测系统的选择
选择优良的抗体和检测试剂盒,新买抗体要进行敏感性测试,找到佳的抗原修复条件,每次试验要设置相应的阳性和阴性对照。
试剂的使用在其有效期内,同时经常观察抗体使用过程中的结果变化,如不理想要及时更换。
四、显色和复染
不要忽视显色过程,和常规染色类似,显色不恰当也会造成染色的前功尽弃。不同的组织、不同的抗体显色时间有差异,必要时使用显微镜观察切片的显色效果。
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