鼻咽癌细胞；CNE2

形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：1983年由谷淑燕、孔繁裔等建系；源自人鼻咽低分化鳞癌组织；原代细胞胰蛋白酶消化，48小时开始生长，**传代20天。裸鼠体内移植100%成瘤。

培养条件：RPMI1640+10%bovinecalfserum

传代方法:1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

2-氟-6- 98%GKRP(Human glucokinase regulatory protein) ELISA Kit  人葡萄糖激酶调节蛋白兔血管**素样蛋白4(ANGPTL4)酶联吸附测定试剂盒  

3-氟-2- 99% HA(Human hemagglutinin) ELISA Kit  人血凝素兔结缔组织活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)酶联吸附测定试剂盒  

4-氟-2- 98%ADRP(Human adipose differentiation-related protein) ELISA Kit  人脂肪分化相关蛋白兔巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)酶联吸附测定试剂盒

4-氟-3- 98%CALD(Human Caldesmon) ELISA Kit  人钙调结合蛋白兔前列腺素D合成酶(PGDS)酶联吸附测定试剂盒

5-氟-2- 99%CaN(Human calcineurin) ELISA Kit  人钙调酶兔突触核蛋白α(SNCα)酶联吸附测定试剂盒

2-氟-3-硝 98%Human CTX-2 ELISA Kit  人骨退化特异标志物兔6-羟多巴(6-OHDA)酶联吸附测定试剂盒  

2-羟三氟 98%CR(Human Calretinin) ELISA Kit  人钙结合蛋白兔伴侣蛋白10(CPN10)酶联吸附测定试剂盒

2-氧-5-硝三氟 98%BMP-6(Human Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit  人骨形成蛋白6兔状旁腺受体2(PTHR2)酶联吸附测定试剂盒

4--3-三氟 97%FABP(Human fatty acid-binding protein) ELISA Kit  人脂肪结合蛋白兔蛋白激酶D1(PKD1)酶联吸附测定试剂盒

2-三氟 98%ABCA1(Human ATP-binding cassette transporter A1) ELISA Kit  人腺苷三结合盒转运体A1兔碳酐酶III(CA3)酶联吸附测定试剂盒

2--3-硝三氟 97% HRGP(Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein) ELISA Kit  人羟脯氨糖蛋白兔生长相关蛋白43(GAP43)酶联吸附测定试剂盒

3-三氟 98%GLUT1(Human Glucose transporter 1) ELISA Kit  人葡萄糖转运蛋白1兔可溶性间粘附分子1(sICAM-1)酶联吸附测定试剂盒

4-三氟 98%LDL(Human low density lipoprotein) ELISA Kit  人低密度脂蛋白兔NOD样受体(NLR)酶联吸附测定试剂盒

2-(三氟)苄溴 98%AA(Human Arachidonic Acid) ELISA Kit  人花生四烯兔凋亡相关因子(FAS/CD95/TNFRSF6)酶联吸附测定试剂盒

4-(三氟)苄溴 98%BSP(Human bone sialoprotein) ELISA Kit  人骨涎蛋白兔丝裂原激活蛋白激酶激酶6(MAP2K6/MKK6)酶联吸附测定试剂盒
鼻咽癌细胞；CNE2丝状血球凝集素Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA3  原钙粘附蛋白α3抗体

FK506结合蛋白8Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA2  原钙粘附蛋白α2抗体

Ring1和YY1结合蛋白Elisa试剂盒PE-Cy7标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA12  原钙粘蛋白12抗体

外核苷三二水解酶2Elisa试剂盒罗丹明标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA11  原钙粘蛋白11抗体

LIM半胱氨丰富域蛋白1Elisa试剂盒FITC标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA10/CNRN8  钙粘蛋白相关神经受体8抗体

丝氨;苏氨激酶26Elisa试剂盒胶体金标记的羊抗豚鼠IgGPCDHA1  原钙粘附蛋白α1抗体

甘露糖结合凝集素2Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的羊抗豚鼠IgGPCDH8  原钙粘附蛋白8抗体

ARMC6Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的羊抗兔IgGPCDH7  原钙粘蛋白7抗体

分裂周期因子42Elisa试剂盒FITC标记的羊抗兔IgGPCDH20  原钙粘附蛋白20抗体

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