结直肠腺癌细胞；NCI-H716

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形态特性：上皮细胞样

生长特性：悬浮生长，聚团，少数贴壁

特征特性：从一位经5-氟尿嘧啶治的患者腹水中得到的细胞建立了这个细胞株。与其它结直肠癌细胞系不同，这株细胞有多巴脱羧酶，细胞质中有核心致密的内泌型颗粒。这株细胞不表达TAG-72或CA19-9抗原，也不**癌胚抗原（CA-A）

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法:1:3～1:6传代，每周换液2～3次
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

溴乙苄酯 96%ON(Human osteonectin) ELISA Kit  人骨粘连蛋白兔封闭蛋白11(CLDN11)酶联吸附测定试剂盒

2-溴丁 98%FA(Human Folic acid) ELISA Kit  人叶兔蕈碱型乙酰胆碱受体(M-AChR)酶联吸附测定试剂盒

乙仲丁酯 99%ET(Human endotoxin) ELISA Kit  人内素兔成纤维生长因子7(FGF7/KGF)酶联吸附测定试剂盒

乙仲丁酯 97.5%PPAR- Gamma(Human Peroxisome Proliferator-activated receptor Gamma) ELISA Kit  人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ兔信号传导转录激活因子2(STAT2)酶联吸附测定试剂盒

乙仲丁酯 Standard for GCCsA(Human Cyclosporine A) ELISA Kit  人环孢素A兔前列腺素F2α(PGF2α)酶联吸附测定试剂盒

乙叔丁酯 99%GFAP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人神经胶质纤维性蛋白兔丝氨蛋白酶23(PRSS23)酶联吸附测定试剂盒

乙异酯 99%15-LO/LOX(Human 15-lipoxygenase) ELISA Kit  人15脂加氧酶兔脱氧核糖核酶I(DNase-I)酶联吸附测定试剂盒

环戊烷 96%CETP(Human glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  人胆固酯转移蛋白兔神经营养因子受体3型(NTRK3)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 GCS，≥99.7% (GC)LTC4(Human Leukotriene C4) ELISA Kit  人白三烯C4兔无孢蛋白(ASPN)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 for HPLC, ≥99.5%Cyt-C(Human Cytochrome-C) ELISA Kit  人色素C兔游离状腺原氨(fT3)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 96%LPL(Human lipoprotein lipase) ELISA Kit  人脂蛋白脂酶兔脱氢表雄酮(DHEA)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 98%GP-II(Human Glycogen phosphorylase II) ELISA Kit  人糖原化酶同工酶II兔谷氨脱羧酶样蛋白1(GADL1)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 光谱纯, ≥99.5%GP-MM(Human Glycogen phosphorylase MM) ELISA Kit  人糖原化酶同工酶MM兔Rap鸟嘌呤交换因子1(RAPGEF1)酶联吸附测定试剂盒

异戊烷 分析标准品，≥99.9% (GC)GP-BB(Human Glycogen phosphorylase BB) ELISA Kit  人糖原化酶同工酶BB兔多聚血清蛋白(PHSA)酶联吸附测定试剂盒

正戊烷 CP,98%Lp- Alpha(Human lipoprotein Alpha) ELISA Kit  人脂蛋白α兔血小板膜糖蛋白VI(GP6)酶联吸附测定试剂盒
结直肠腺癌细胞；NCI-H716黑色素瘤标记物Elisa试剂盒Cy5标记的羊抗鸡IgGPBR/DBI/TSPO  外周二氮受体抗体

强肽AElisa试剂盒Cy5.5标记的羊抗鸡IgGPBOV1  前列腺癌和癌高表达蛋白抗体

谷氨酰果糖-6-转氨酶2Elisa试剂盒Cy7标记的羊抗鸡IgGPBLD/MAWBP  MAWD结合蛋白抗体

周期蛋白依赖性激酶6Elisa试剂盒PE标记的羊抗鸡IgGPBK/TOPK  PDZ连接激酶/T-LAK源蛋白激酶抗体

叉头框蛋白O1Elisa试剂盒PE-Cy3标记的羊抗鸡IgGPBEF1(CT)  内脂素/内脏脂肪素(C端抗体)

真核翻译起始因子4A3Elisa试剂盒PE-CY5标记的羊抗鸡IgGPBEF(NT)  内脂素/内脏脂肪素抗体（N端）

周期蛋白依赖性激酶4Elisa试剂盒APC标记的羊抗鸡IgGPBEF (CT)  内脂素/前B克隆增强因子-2（C端抗体）

Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的羊抗鸡IgGPaxillin  桩蛋白Paxillin抗体

表皮生长因子受体3Elisa试剂盒罗丹明标记的羊抗鸡IgGPAX9  配对盒因9抗体