结直肠腺癌上皮细胞；DLD-1

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形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：DLD-1是1977-1979年间D.L.Dexter和同事分离的两株结直肠腺癌细胞株中的一株。在ATCC和其它地方进行的DNAfingerprinting和染色体组型分析表明这株细胞与HCT-15(CCL-225)相似，说明这两者是来自同一个人的不同克隆。他们的遗传起源可通过DNAfingerprinting证实，但染色体组型分析显示它们缺乏染色体标记一致改变或数目上一致改变。细胞的CSAp阴性(CSAp-)。DLD-1细胞的p53抗原表达呈阳性(p5
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

烯丁酯 Standard for GC,>99.5%(GC)EAR12(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 12) ELISA KIT  人嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员12兔红补体受体1 (CR1)酶联吸附测定试剂盒

对氧 AR，99.0% EAR3(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3)ELISA Kit  人嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3兔谷胱甘肽S-转移酶θ1(GSTθ1/GSTt1)酶联吸附测定试剂盒

烟碱 95%（剧品）EAR2(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 2)ELISA Kit  人嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2兔着丝粒蛋白A(CENPA)酶联吸附测定试剂盒

邻二二异辛酯 CP，98%DPYSL3(Human dihydropyrimidinase-like 3) ELISA Kit  人二氢嘧啶酶样3兔趋化素样因子超家族成员5(CKLFSF5)酶联吸附测定试剂盒

邻二二辛酯 GRWARS(Human tryptophanyl-tRNA synthetase) ELISA Kit  人色氨酰tRNA合成酶兔腺苷环化酶2(ADCY2)酶联吸附测定试剂盒

邻二二异辛酯 AR,99%WARS(Human tryptophanyl-tRNA synthetase) ELISA Kit  人色氨酰tRNA合成酶兔胸腺非依赖性抗原(TI-Ag)酶联吸附测定试剂盒

双醋酯 45.0 - 50.0%HK3(Human hexokinase 3) ELISA Kit  人己糖激酶3兔蛋白激酶抑制剂β(PKIβ)酶联吸附测定试剂盒

乙异辛酯  99%PFKP(Human phosphofructokinase-plaet) ELISA Kit  人血小板型果糖激酶兔谷胱甘肽S转移酶ω1(GSTω1)酶联吸附测定试剂盒

乙酯 CP，98%UGCG(Human UDP-glucose ceramide glucosyltransferase) ELISA Kit  人尿苷二葡萄糖神经酰葡萄糖转移酶兔血管**素(ANG)酶联吸附测定试剂盒

安格洛苷C 98%Casp4(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人凋亡相关半胱氨肽酶4兔膀胱癌抗原(UBC)酶联吸附测定试剂盒

右旋比灵碱 分析标准品PDXK(Human caspase 4-apoptosis-related cysteine peptidase) ELISA Kit  人吡哆/吡哆维生素B6激酶兔三叶因子1(TFF1)酶联吸附测定试剂盒

右旋比灵碱 98%DPYSL2(human dihydropyrimidinase-like 2) ELISA Kit  人二氢嘧啶酶样2兔状腺自身抗体(THAA)酶联吸附测定试剂盒

雷公藤红素  分析标准品，≥98%SGK2(Human serum/glucocorticoid regulated kinase 2) ELISA KIT  人血清/糖皮质调节激酶2兔质金属蛋白酶17(MMP-17)酶联吸附测定试剂盒

雷公藤红素  98%MKK6(Human mitogen activated protein kinase kinase 6) ELISA Kit  人丝裂原活化蛋白激酶激酶6兔异常凝血酶原(APT)酶联吸附测定试剂盒  

马钱子苷 98%PDXP(Human pyridoxal/pyridoxine vitamin B6-phosphatase) ELISA Kit  人吡哆/吡哆维生素B6酶兔生长分化因子2(GDF2)酶联吸附测定试剂盒
结直肠腺癌上皮细胞；DLD-1交替氧化酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的羊抗人IgMPAR-2  蛋白酶激活受体-2抗体

AFB1白蛋白Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的羊抗人IgMPAR-1/Thrombin receptor  蛋白酶激活受体-1抗体

V型ATP酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记的羊抗人IgMPAP-α/β/γ  多聚合酶α/β/γ抗体

胰凝蛋白酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的羊抗人IgMPAPSS2  腺苷硫激酶2抗体

肿廇蛋白P63Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的羊抗人IgMPAPSS1  腺苷硫激酶1抗体

色素P450 11A;BElisa试剂盒PE-Cy7标记的羊抗人IgMPAPPA  相关血浆蛋白A抗体

色素P450 17Elisa试剂盒Cy3标记的羊抗人IgMPAPP A2  相关血浆蛋白A2抗体

色素P450 19Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的羊抗人IgMPAPK/ALS2CR2  肌侧索硬化症相关蛋白2（2号染色体）抗体

色素P450 21Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgMPAP2c/AP2-gamma  脂酶2C抗体