实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个;
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台;
产品名称
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规格
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货号
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结肠癌紫衫醇耐药株
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T25
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FS-X3223
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形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
培养条件:RPMI-1640
传代方法:1:2传代
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冻存培养基:
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上��离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
氧化镁 AR,98.0%ADAM10(Human A Disintegrin And Metalloprotease 10) ELISA Kit 人解整合素样金属蛋白酶10兔球蛋白M(IgM)酶联吸附测定试剂盒
氢氧化镁 AR,95%MMP11(Human matrix metalloproteinase 11) ELISA Kit 人质金属蛋白酶11兔OJ抗体/抗异亮氨酰tRNA合成酶抗体(OJ/IleRS)酶联吸附测定试剂盒
氢氧化镁 CP,95%TS(Human thymidylate synthetase) ELISA Kit 人胸苷合成酶兔IV D组脂酶A2(PLA2G4D)酶联吸附测定试剂盒
氢氧化镁 Ultra pure,≥99.0% (KT)TPHuman thymidinephosphorylase) ELISA Kit 人胸腺嘧啶核苷化酶兔甘露聚糖结合凝集素相关丝氨蛋白酶1(MASP1)酶联吸附测定试剂盒
碱式碳镁 ARPARP(Human Poly ADP ribose polymerase) ELISA Kit 人多聚ADP核糖聚合酶兔粘蛋白17(MUC17)酶联吸附测定试剂盒
海藻钠 CP,粘度200±20mpa.sGCK(Human glucokinase) ELISA Kit 人葡萄糖激酶兔脾脏酪氨激酶(SYK)酶联吸附测定试剂盒
1-丁烷 98%MAO(Human monoamine oxidase) ELISA Kit 人单氧化酶兔角质转谷氨酰酶(TGM1)酶联吸附测定试剂盒
1-辛烷 99%cPLA2(Human cytosolic phospholipase A2) ELISA Kit 人胞浆型脂酶A2兔补体C5转化酶(C5c)酶联吸附测定试剂盒
1-辛烷 分析标准品DAO(Human diamine oxidase) ELISA Kit 人二氧化酶兔鞘脂激活蛋白原(PSAP)酶联吸附测定试剂盒
二月桂二丁锡 95%COX-2(Human cyclooxygenase-2) ELISA Kit 人环加氧酶2兔单核趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)酶联吸附测定试剂盒
丁锡 Sn 56.5%±0.5%CDK5(Human Cyclin Dependent Kinase 5) ELISA Kit 人周期素依赖性激酶5兔扩张性共济失调突变因子(ATM)酶联吸附测定试剂盒
三丁化锡 96%KLK 10(Human Kallikrein 10) ELISA Kit 人激肽释放酶10兔轴蛋白抑制蛋白2(AXIN2)酶联吸附测定试剂盒
三丁化锡 分析标准品PLC Gamma1(Human Phospholipase C Gamma1) ELISA Kit 人酯酶Cγ链兔抗心脂抗体IgA(ACA-IgA)酶联吸附测定试剂盒
三正丁氢化锡 96%NA(Human neuraminidase) ELISA Kit 人神经氨酶兔转录激活因子-4(ATF-4)酶联吸附测定试剂盒
三丁氧化锡 分析标准品PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C) ELISA Kit 人酯酰肌特异性酯酶C兔去唾液糖蛋白受体2(ASGR2)酶联吸附测定试剂盒
结肠癌紫衫醇耐药株ATP合酶亚OElisa试剂盒Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgGpan methyl Lysine 泛赖氨抗体
糜蛋白酶Elisa试剂盒PE-Cy3标记的小鼠抗人IgGpan 14-3-3 14-3-3蛋白抗体
组蛋白Elisa试剂盒PE-CY5标记的小鼠抗人IgGPALB2 癌易感因相关蛋白2
脱氢酶BElisa试剂盒APC标记的小鼠抗人IgGPAK7/PAK5/MBT 激活激酶PAK7抗体
雷帕霉素靶蛋白C1Elisa试剂盒Cy3标记的小鼠抗人IgGPAK6 P21蛋白激活的蛋白激酶6抗体
二乙酰转移酶Elisa试剂盒Cy5标记的小鼠抗人IgGPAK4 小鼠抗p21激活激酶4抗体
精脒;精N1-乙酰转移酶1Elisa试剂盒Cy5.5标记的小鼠抗人IgGPAK4 p21激活激酶4抗体
精脒;精N1-乙酰转移酶1Elisa试剂盒Cy7标记的小鼠抗人IgGPAK2 p21激活激酶2抗体
乙型脑炎病Elisa试剂盒罗丹明标记的小鼠抗人IgMPAK1 p21激活激酶1抗体
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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