结肠癌细胞；SW620

形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：SW620是从一个51岁男性白人组织中分离得到。由A.Leibovitz等从一个**结建株。细胞系主要由无绒毛的小园球细胞和双极细胞组成。它仅合成少量癌胚抗原（CA-A）且在裸鼠中有高度的致瘤性

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法:1:3传代，2-3天换液一次

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细���适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

N-乙 99%PDI(Human Protein disulfide-isomerase precursor) ELISA Kit  人蛋白二硫化物异构酶前体兔颗粒体蛋白(GRN)酶联吸附测定试剂盒

靛红 Biological stainPDIA3(Human protein disulfide-isomerase A3) ELISA Kit  人蛋白二硫化物异构酶A3兔解旋酶样转录因子(HLTF)酶联吸附测定试剂盒

靛红 ARSDH(Human sorbitol dehydrogenase) ELISA Kit  人山梨脱氢酶兔胆固(CH)酶联吸附测定试剂盒

靛红 98%PPI(Human Peptidyl prolyl cis/trans isomerase) ELISA Kit  人肽脯氨酰顺反异构酶兔血栓调节蛋白(TM)酶联吸附测定试剂盒

L- 96%OCT(Human ornithine carbamoyl transferase) ELISA Kit  人鸟氨氨酰转移酶兔抑瘤素M受体(OSMR)酶联吸附测定试剂盒

DL- AR，85-90%vaspin(Human Visceral adipose-specific serine protease inhibitor) ELISA Kit  人内脏脂肪特异性丝氨蛋白酶抑制剂兔角蛋白17(CK17/KRT17)酶联吸附测定试剂盒

DL- CP，85-90%PP(Human Protein Phosphatase) ELISA Kit  人蛋白酶兔脱氢酶C(LDHC)酶联吸附测定试剂盒  

DL- ACS, ≥85%TrxR(Human thioredoxin reductase) ELISA Kit  人硫氧还蛋白还原酶兔乙酰辅酶A乙酰转移酶2(ACAT2)酶联吸附测定试剂盒

DL- 药用级HLE(Human leukocyte exastase) ELISA Kit  人白弹性蛋白酶兔促生长释放(GHRH)酶联吸附测定试剂盒

DL- Standard for GCHuman Elastase ELISA Kit  人弹性蛋白酶兔金属硫蛋白1E (MT1E)酶联吸附测定试剂盒

L-溶液 60%水溶液AMS/AMY(Human Alpha-Amylase) ELISA Kit  人α淀粉酶兔乙脱氢酶1(ADH1)酶联吸附测定试剂盒

L-钠  AR，60%水溶液ALP(Human alkaline phosphatase) ELISA Kit  人碱性酶兔碳酐酶II(CA2)酶联吸附测定试剂盒

DL-钠 60%水溶液AZU(Human azurocidin) ELISA Kit  人天青杀素兔状腺过氧化物酶(TPO)酶联吸附测定试剂盒

7-氨吲哚 97%ATA(Human Angiotensinase A) ELISA Kit  人血管紧张肽酶A兔质金属蛋白酶原10 (Pro-MMP-10)酶联吸附测定试剂盒

4-氨吲哚 97%PAMY(Human Pancreatic Amylase) ELISA Kit  人胰淀粉酶兔二肽肽酶VI (DPP6)酶联吸附测定试剂盒
结肠癌细胞；SW620二十二碳六烯Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的小鼠抗人IgMPAFAH1B3/PAFAHG  血小板衍化生长因子γ抗体

抗类固**抗体Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的小鼠抗人IgMPAFAH1B2  血小板衍化生长因子β抗体

全转运谷氨素Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgMPAF  血小板活化因子抗体

C-C趋化因子受体6Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgMPADI4  关节炎相关因抗体

白酯酶Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgMPACRG  麻疯病和帕金森氏病共同调节蛋白抗体

15s-羟化二十碳四烯Elisa试剂盒PE-Cy7标记的小鼠抗人IgMPACAP-38  腺苷环化酶激活肽-38抗体

几丁质酶1Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的小鼠抗人IgMPACAP-27/38  腺苷环化酶激活肽-27/38抗体

纤维蛋白原βElisa试剂盒胶体金标记的小鼠抗人IgMPACAP R1  腺苷环化酶激活肽受体1抗体

β抑制蛋白1Elisa试剂盒Cy7标记的小鼠抗人IgMPABP (Methyl Arg455/460)  化多聚腺苷结合蛋白抗体