结肠癌细胞；Caco2

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形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：此细胞株分离自一个原发性结肠癌。当细胞长满时，表现出典型的肠细胞分化的特征。Caco-2细胞表达维生素A酸结合蛋白I和视黄醇结合蛋白II，角蛋白阳性。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法:1：2传代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

L-肾上腺素 98%（剧品）PKB(Human protein kinase B) ELISA Kit  人蛋白激酶B兔重去肾上腺素(NEB)酶联吸附测定试剂盒

4-羟-6--2-吡喃酮 99%HO-2(Human heme oxygenase 2) ELISA Kit  人血红素氧合酶2兔糖化白蛋白(GA)酶联吸附测定试剂盒

烟 99%M2-PK (Human Pyruvate Kinase) ELISA Kit  人酮激酶M2型同工酶兔嗜铬蛋白A/胰抑制素(CgA/Pancreastatin)酶联吸附测定试剂盒  

烟 分析标准品TPO(Human Thyroid-Peroxidase) ELISA Kit  人状腺过氧化物酶兔降钙素受体(CTR)酶联吸附测定试剂盒

重去肾上腺素 ≥98%(HPLC),USPAFU(Human alpha-L-fucosidase) ELISA Kit  人αL岩藻糖苷酶兔β2糖蛋白1抗体IgM(β2-GP1 Ab IgM)酶联吸附测定试剂盒

烟 用于植物培养，≥99%eNOS(Human Endothelial nitric oxide synthase) ELISA Kit  人内皮型一氧化氮合成酶兔硒蛋白1(SEP1)酶联吸附测定试剂盒

5-乙-2-吡啶 97%HO-1(Human heme oxygenase 1) ELISA Kit  人血红素氧合酶1兔肌肉糖原化酶(PYGM)酶联吸附测定试剂盒

环氧烷 Standard for GC，≥99.6% (GC)iNOS(Human inducible nitric oxide synthase) ELISA KIT  人诱导型一氧化氮合成酶兔胎蛋白异质体3(AFP-L3)酶联吸附测定试剂盒

环氧烷 ARPL-A2(Human Phospholipidase A2) ELISA Kit  人脂酶A2兔血幼素(HJV/HFE2)酶联吸附测定试剂盒  

环氧烷 CPNOS(Human nitric oxide synthase) ELISA Kit  人一氧化氮合成酶兔αL艾杜糖酶(IDUα)酶联吸附测定试剂盒

环氧烷 ≥99.5% (GC)TE(Human omerase) ELISA Kit  人端粒酶兔Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)酶联吸附测定试剂盒

环氧烷 分析标准品MMP-5(Human matrix metalloproteinase 5) ELISA Kit  人质金属蛋白酶5兔干因子(SCF)酶联吸附测定试剂盒

2,6-二吡啶 98%MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4) ELISA Kit  人质金属蛋白酶4兔S100钙结合蛋白A11(S100A11)酶联吸附测定试剂盒

3,5-二吡啶 98%MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B) ELISA Kit  人质金属蛋白酶9/明胶酶B兔Bcl-2样蛋白1(BCL2L1/BCL-X)酶联吸附测定试剂盒

乙酰乙酯  99%NSE(Human Neuron-specific enolase) ELISA Kit  人神经特异性烯化酶兔甘露糖受体C1(MRC1)酶联吸附测定试剂盒
结肠癌细胞；Caco2腺苷活化蛋白激酶Elisa试剂盒PE-Cy3标记的小鼠抗牛IgGORP4/OSBP2  氧化固结合蛋白4抗体

果糖激酶2Elisa试剂盒PE-CY5标记的小鼠抗牛IgGORP150  氧气调节蛋白150抗体

N-乙酰氨半糖转移酶Elisa试剂盒APC标记的小鼠抗牛IgGOrosomucoid 2  类粘蛋白2抗体

β1,3半糖转移酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的小鼠抗牛IgGOrexin-A  增食欲素A/欲A

α2,6-唾液转移酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的小鼠抗牛IgGORAV1  口腔癌高表达的蛋白1抗体

白分化抗原27Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记的小鼠抗牛IgGOrai2  跨膜蛋白Orai2抗体

前列腺特异性抗原前体Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的小鼠抗牛IgGOPN/BSP  骨桥蛋白抗体(型蛋白1)人

甘露糖转移酶2Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的小鼠抗牛IgGOPN/BSP  骨桥蛋白抗体(型蛋白1)

色素P450 4A11Elisa试剂盒罗丹明标记的小鼠抗牛IgGOPGL/RANKL/ODF  骨保护蛋白配体抗体(破骨分化因子)