小细胞肺癌细胞；NCI-H446

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形态特性：上皮样

生长特性：贴壁/悬浮生长，混合

特征特性：该细胞是1982年由CarneyD和GazdarAF等从一位小细胞肺癌患者的胸腔积液中建立的。细胞的原始形态并不具有小细胞肺癌特征。这个细胞株是小细胞肺癌的生化和形态学上的变种，表达神经元特有的烯醇酶和脑型肌酸激酶同工酶；多巴脱羧酶、蚕素、抗**、催产素或胃泌释放肽未达到可检测水平。与正常细胞相比，该细胞CS-mycDNA序列扩增约20倍，RNA增加15倍。初传代培养基用含有5%FBS的RPMI1640，另外添加10nM氢化可的松、
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

碳化锆 99%,1μmhs-CRP(Human high sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit  人超敏C反应蛋白兔睾酮受体(TR)酶联吸附测定试剂盒

氧化铈 20nm 球形，99.5%Tn- I (Human Troponin I ) ELISA Kit  人肌钙蛋白Ⅰ兔肌营养**蛋白(DMD)酶联吸附测定试剂盒

氧化镝 ≥99.99% metals basisSAA(Human Serum amyloid A) ELISA Kit  人血清淀粉样蛋白A兔I型胶原交联氨端肽(NTXI)酶联吸附测定试剂盒  

氧化镝 40nm 球形，99.5%Hsp-60(Human Heat Shock Protein 60) ELISA Kit  人热休克蛋白60兔B活化因子 (BAFF/CD257/TNFSF13B)酶联吸附测定试剂盒

氧化铒 99.9% metals basisHSP gp96(Human Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit  人热休克蛋白糖蛋白96兔黑素转铁蛋白(MFI2)酶联吸附测定试剂盒

氧化铕 99.99% metals basisCT-1(Human cardiotrophln 1) ELISA Kit  人心肌营养素1兔粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP)酶联吸附测定试剂盒  

氧化钆 99.9% metals basisCP/CER(Human Ceruloplasmin) ELISA Kit  人铜蓝蛋白兔糖盏蛋白(GC)酶联吸附测定试剂盒

氧化钆 99.99% metals basisHSP-90(Human Heat Shock Protein 90) ELISA Kit  人热休克蛋白90兔颗粒酶B(GzmB)酶联吸附测定试剂盒

氧化钬 99.99% metals basisHSP-70(Human Heat Shock Protein 70) ELISA Kit  人热休克蛋白70兔核孔蛋白153kda(NUP153)酶联吸附测定试剂盒

纳米氧化钬 99.9% metals basis,<100 nm particle size (BET)HSP-40(Human Heat Shock Protein 40) ELISA Kit  人热休克蛋白40兔辅肌动蛋白α3(ACTN3)酶联吸附测定试剂盒

氧化镧 99.99% metals basisHSP-20(Human Heat Shock Protein 20) ELISA Kit  人热休克蛋白20兔弹性蛋白酶2B(ELA2B)酶联吸附测定试剂盒  

氧化镧 99.999% metals basisMYS(Human Myosin) ELISA Kit  人肌球蛋白兔前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)酶联吸附测定试剂盒

氧化镥  99.99% metals basisGS(Human Gelsolin) ELISA Kit  人凝溶胶蛋白兔补体因子B(CFB)酶联吸附测定试剂盒

氧化钕 99.9% metals basisCRP(Human C-Reactive Protein) ELISA Kit  人C反应蛋白兔蛋白酶激活受体2(PAR2)酶联吸附测定试剂盒

氧化钕 99%ALD(Human aldosterone) ELISA Kit  人固酮兔球蛋白A Fc段受体(FcαR/CD89)酶联吸附测定试剂盒
小细胞肺癌细胞；NCI-H446肌肉特异性泛素蛋白连接酶1Elisa试剂盒Cy5标记的兔抗生物素抗体IgGNUPR1/p8  核蛋白p8抗体

活化转录因子6Elisa试剂盒Cy5.5标记的兔抗生物素抗体IgGNUP88  核孔复合体蛋白88抗体

前列腺蛋白Elisa试剂盒Cy7标记的兔抗生物素抗体IgGNUP54  NUP54抗体

流感病A IgM抗体Elisa试剂盒PE标记的兔抗生物素抗体IgGNUP50  核孔蛋白50抗体

囊虫病Elisa试剂盒PE-Cy3标记的兔抗生物素抗体IgGNUP37  核孔蛋白Nup37抗体

副流感病1,2,3型IgG抗体Elisa试剂盒PE-CY5标记的兔抗生物素抗体IgGNUP160  核孔蛋白NUP160抗体

副流感病1,2,3型IgM抗体Elisa试剂盒APC标记的兔抗生物素抗体IgGNUMB  膜相关蛋白Numb抗体

寨卡病IgM抗体Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的兔抗生物素抗体IgGNuMA  核有丝分裂器NuMA蛋白抗体

环氧二十碳三烯Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的兔抗生物素抗体IgGNUDEL/NDEL1  中心粒蛋白Nudel抗体

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