NCI-H226细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：肺鳞癌细胞；NCI-H226
形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：1980年分离建立。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
2-溴酰溴 97%CLEC4E(Human C-type lectin domain family 4 member e) ELISA Kit  人C型凝集素结构域家族4成员E兔巨噬清道夫受体1 (MSR1)酶联吸附测定试剂盒

粘 99%Human Hypothetical protein LOC677168 ELISA Kit  人假定蛋白LOC677168兔转录因子20(TCF20)酶联吸附测定试剂盒

酰溴  95%Ly6a(Human lymphocyte antigen 6 complex locus A) ELISA Kit  人抗原6复合物因座A兔褪黑素(MT)酶联吸附测定试剂盒

皂土(膨润土) Bentone SD-1，适于中至低性溶剂EAR1(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 1) ELISA KIT  人嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员1兔趋化素样因子超家族成员4(CKLFSF4)酶联吸附测定试剂盒

皂土(膨润土) Bentone SD-2，适于中高性溶剂MLKL(Human mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit  人混合系列蛋白激酶样结构域兔蛋白激酶抑制剂α(PKIα )酶联吸附测定试剂盒

BENTONE 27，应用在中等到高等性溶剂PPARGC1(Human peroxisome proliferative activated receptor gama coactivator 1 alpha) ELISA Kit  人过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α兔唾液结合球蛋白样凝集素10(SIGLEC10)酶联吸附测定试剂盒

皂土(膨润土) BENTONE 38，应用在性溶剂体系中human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit  人类似cDNA顺序BC027382兔多功能蛋白聚糖(VS)酶联吸附测定试剂盒

锌粒 99.99% metals basishuman similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit  人类似RIKEN cDNA 4931408D14 因兔胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)酶联吸附测定试剂盒  

二二硒 99%RCOR3(Human REST corepressor 3) ELISA Kit  人REST协阻抑因子3兔血管紧张素I受体抗体(ANG I R-Ab)酶联吸附测定试剂盒

鸟嘌呤 99%COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit  人集蛋白亚家族成员11兔麦考酚(MPA)酶联吸附测定试剂盒

鸟嘌呤盐盐 ≥99.0% (HPLC)Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit  人α1β糖蛋白兔尿素酶相关蛋白C(UreC)酶联吸附测定试剂盒

6-硫鸟嘌呤 98%sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit  人可溶性髓系触发受体-1兔状腺素抗体(TAb)酶联吸附测定试剂盒

0.98MSTN(Human Myostatin) ELISA Kit  人肌抑素兔活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)酶联吸附测定试剂盒

 ≥99.5% (HPLC)MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit  人黑素瘤衍生亮氨拉链额外核因子兔血小板衍生生长因子亚A(PDGFA)酶联吸附测定试剂盒

秋水仙碱 分析标准品，≥99%(HPLC)UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit  人二尿核苷葡糖转移酶2家族肽B4兔α-骨胶原交联(α-CTx)酶联吸附测定试剂盒
NCI-H226细胞融合蛋白Elisa试剂盒PE标记的兔抗牛IgGNT5C2  胞浆-5´-核苷酶-Ⅱ抗体

去泛素化酶Elisa试剂盒PE-Cy3标记的兔抗牛IgGNT5C1A  胞质5'核苷酶1A抗体

去泛素化酶Elisa试剂盒PE-CY5标记的兔抗牛IgGNT-4/NT-5  神经生长因子4/5抗体

二氢生物蝶呤Elisa试剂盒APC标记的兔抗牛IgGNT-3 proprotein  神经营养因子-3前蛋白抗体

泛素蛋白Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的兔抗牛IgGNT-3  神经营养因子3抗体

苹果脱氢酶Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的兔抗牛IgGNT/NTS1/NTRH  神经降压素抗体

CC趋化因子受体3Elisa试剂盒Alexa Fluor 555标记的兔抗牛IgGNSPL2/RTN3  神经特异性蛋白2抗体

α-糖苷酶Elisa试剂盒PE-Cy3标记的兔抗牛IgMNSP5  核结构蛋白5抗体

轮状病抗体Elisa试剂盒PE-CY5标记的兔抗牛IgMNSP1/SH2D3A  SH2结构域蛋白3A抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。