实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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NCI-H1650细胞
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T25
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FS-X3249
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产品名称：非小细胞肺癌细胞；NCI-H1650
形态特性：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：该细胞是从一名27岁白人男性（10年烟龄）支气管肺泡癌患者的胸腔积液中分离得到的。
培养条件：DMEM（高糖）+10%FBS
传代方法：1:4~1:6传代；2~3天换液1次。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
L-3-三氟氨 96%APCR(Human activated protein C resistance) ELISA Kit 人活化蛋白C抵抗素兔脂蛋白关联脂酶A2(LpPLA2)酶联吸附测定试剂盒
4-(三氟)-D-氨 98%Ext-N(Human N-terminal extein) ELISA Kit 人N端外显肽兔间粘附分子4(ICAM-4)酶联吸附测定试剂盒
L-4-三氟氨 99%SC(Human secretory component) ELISA Kit 人成分兔纤维蛋白原相关蛋白1(FGL1)酶联吸附测定试剂盒
D-2-三氟氨 98%ADP(Human Adenosine diphosphate) ELISA Kit 人二腺苷兔肌腱蛋白X(TNX)酶联吸附测定试剂盒
2-(三氟)-L-氨 98%PG(Human Proteoglycan) ELISA Kit 人蛋白聚糖兔色素P450氧化还原酶(CPR)酶联吸附测定试剂盒
6-巯嘌呤 99.5%PYD(Human Pyridinoline) ELISA Kit 人吡啶酚兔平滑肌肌球蛋白(SMM)酶联吸附测定试剂盒
6-巯嘌呤 98%5-HIAA(Human 5-hydroxyindolacetic acid) ELISA Kit 人5羟吲哚乙兔糖化血红蛋白(HbA1c)酶联吸附测定试剂盒
10-十一烯 95%12-HETE(Human 20-hydroxyeicosatetraenoic acid) ELISA Kit 人12羟二十烷四烯兔脂蛋白a(LP-a)酶联吸附测定试剂盒
10-十一烯 98%Hyp(Human hydroxyproline) ELISA Kit 人羟脯氨兔促状腺素释放(TRH)酶联吸附测定试剂盒
活性氧化铝 40-60目 GCNO(Human nitric oxide) ELISA Kit 人一氧化氮兔角蛋白20(CK20/KRT20)酶联吸附测定试剂盒
活性氧化铝 60-80目 GCENA-78/CXCL5(Human Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit 人上皮中性粒活化肽78兔G蛋白信号调节蛋白4(RGS4)酶联吸附测定试剂盒
活性氧化铝 80-100目 GCVC(Human Vitamin C) ELISA Kit 人维生素C兔状腺结合球蛋白(TBG)酶联吸附测定试剂盒
3A分子筛 20-40目,气相、液相色谱柱VB6(Human Vitamin B6) ELISA Kit 人维生素B6兔大肠癌专一抗原4(CCSA-4)酶联吸附测定试剂盒
3A分子筛 40-60目,气相、液相色谱柱sP-selectin(Human soluble P-selectin) ELISA Kit 人可溶性P选择素兔内皮糖蛋白(ENG/CD105)酶联吸附测定试剂盒
3A分子筛 60-80目,气相、液相色谱柱TIMP-1(Human tissue inhibitors of metalloproteinase 1) ELISA Kit 人质金属蛋白酶抑制因子1兔III型胶原交联羧端肽(CTX-III)酶联吸附测定试剂盒
NCI-H1650细胞心肌肌钙蛋白CElisa试剂盒PE-Cy3标记的兔抗鸡IgMNOX4/NADPH oxidase 4 NADPH氧化酶4抗体
前列腺癌抗原3Elisa试剂盒PE-CY5标记的兔抗鸡IgMNox4/NADH NADPH氧化酶4抗体
α-酰辅酶A消旋酶Elisa试剂盒APC标记的兔抗鸡IgMNox3/NADPH oxidase 3 NADPH oxidase 3抗体
晶状体上皮源性生长因子Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗狗IgGNOX2/gp91phox NADPH氧化酶2抗体
前列腺特异性膜抗原Elisa试剂盒FITC标记的兔抗狗IgGNox1/NADPH oxidase 1 有丝分裂氧化酶1抗体
氨肽酶NElisa试剂盒胶体金标记的兔抗狗IgGNotch3/4 跨膜受体蛋白Notch-3抗体
脂酰辅酶AElisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗狗IgGNotch1/MOTC 跨膜受体蛋白Notch-1抗体
精氨脱亚氨酶Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的兔抗狗IgGNotch 2 跨膜受体蛋白Notch-2抗体
粘蛋白4Elisa试剂盒生物素标记的兔抗狗IgGNOS-3/eNOS 一氧化氮合成酶-3抗体（内皮型）
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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