WI-38细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：胚肺成纤维细胞；WI-38
形态特性：成纤维细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：LeonardHayflick建系；有限传代细胞系；寿命为50±10代（倍增时间24h）；来自妊娠3个月的正常胚胎肺组织。该细胞系是个用于人疫苗制备的人二倍体细胞；培养基中添加TNFα可以加快细胞生长。

培养条件：MEM(高糖）+10%FBS

传代方法：1:2~1:4传代；2~3天换液1次

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
螺旋霉素 分析标准品pFN(Human Plasma fibronectin) ELISA kit  人血浆纤维连接蛋白兔神经营养因子3(NT-3)酶联吸附测定试剂盒

螺旋霉素 BCcFn(Human cellular fibronectin) ELISA kit  人纤维连接蛋白兔杀性/通透性增加蛋白(BPI)酶联吸附测定试剂盒  

5-氮胞苷 98%TPS(Human Total protein S) ELISA Kit  人总蛋白S兔外信号调节激酶(ERK)酶联吸附测定试剂盒

6-鸟嘌呤核苷 97%SDPR(human serum deprivation response) ELISA Kit  人血清剥夺反应相关蛋白兔蛋白二硫化物异构酶A6(PDIA6)酶联吸附测定试剂盒

5-氮胞嘧啶 98%HNP1-3(Human neutrophil peptide 1-3) ELISA Kit  防御素1-3兔血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)酶联吸附测定试剂盒

核苷5’-一腺苷钠盐 99%ECP(Human eosinophil cationic protein) ELISA Kit  人嗜性粒阳离子蛋白兔线粒体超氧化物歧化酶2(SOD2)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤 98%PS(Human plasma anticoagulant protein S) ELISA Kit  人血浆抗凝蛋白S兔G蛋白偶联受体120(GPR120)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤 ≥99.5% (HPLC)PC(Human plasma anticoagulant protein C) ELISA Kit  人血浆抗凝蛋白C兔固酮(ALD)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤核苷 用于培养，>99.5%(HPLC)Fc Gamma(Human Fc region of immunoglobulin G) ELISA Kit  人球蛋白G Fc片段兔载脂蛋白E(ApoE)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤核苷  分析标准品CyPB(Human cyclophilin B) ELISA Kit  人嗜环蛋白/亲环素B兔血小板反应蛋白4(TSP-4)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤核苷 超纯级，99.5%C4BP(Human C4 binding protein) ELISA Kit  人C4结合蛋白兔间变性瘤激酶(ALK)酶联吸附测定试剂盒

腺嘌呤核苷 BC，99%C3c(Human Complement fragment 3c) ELISA Kit  人补体片段3c兔脱氢酶B(LDHB)酶联吸附测定试剂盒  

腺嘌呤盐 99%C7(Human Complement fragment 3c0 ELISA Kit  人补体7兔唾液淀粉酶α1(AMY1)酶联吸附测定试剂盒

硫腺嘌呤 用于培养，98%A Beta1-42(Human amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit  人β淀粉样蛋白1-42兔角膜蛋白(KERA)酶联吸附测定试剂盒

硫腺嘌呤 98%（HPLC）Human chemerin ELISA Kit   人chemerin兔β淀粉样前体蛋白(βAPP)酶联吸附测定试剂盒
WI-38细胞DNA聚合酶βElisa试剂盒罗丹明标记的兔抗羊IgGNMDA-NR1/NR1/NMDAR1  天冬氨受体抗体

组织蛋白酶BElisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗羊IgGNm23-H2  肿瘤抑制因抗体

多巴转运蛋白2Elisa试剂盒FITC标记的兔抗羊IgGNm23/NME1/NME2  肿瘤转移抑制因抗体

抗肌内膜IgG抗体Elisa试剂盒胶体金标记的兔抗羊IgGNLRX1/NOD26/NOD9  膜内在蛋白NOD26抗体

西尼罗病IgM抗体Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗羊IgMNLRP9  富含亮氨重复结构域蛋白9抗体

孔肯亚IgM抗体Elisa试剂盒FITC标记的兔抗羊IgMNLRP7  富含亮氨重复结构域蛋白7抗体

孔肯亚IgG抗体Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗羊IgMNLRP10  富含亮氨重复结构域蛋白10抗体

Twist相关蛋白2Elisa试剂盒胶体金标记的兔抗羊IgMNLK/Nemo-like kinase  Nemo样激酶抗体

自身性脑炎抗体Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的兔抗羊IgMNLGN4Y  神经元Y连锁蛋白抗体（儿童自闭症相关蛋白）
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。