QGY-7701细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：肝癌细胞；QGY-7701
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：消化CQ-5分钟，1:2,3天内可长满

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
3,5-二 97%Human macrophage stimulating protein,MSP ELISA Kit  人巨噬激蛋白兔乙酰胆碱受体抗体(AChRab)酶联吸附测定试剂盒

1,4-二 99%Human mammalian target of rapamyein,mTOR ELISA Kit  人雷帕霉素靶蛋白兔红膜蛋白(EMP)酶联吸附测定试剂盒

1，2-二溴丁烷 98%Human Nuclear matrix protein 22,NMP-22 ELISA Kit  人核质蛋白22兔巨噬集落激因子受体(MCSFR)酶联吸附测定试剂盒

代二乙酯 纯度 ≥90%Human cartilage oligomeric protein,COMP ELISA Kit  人软骨寡聚蛋白兔V-Myc骨髓瘤病癌因同源物(MYC)酶联吸附测定试剂盒

N,N-二乙酰 99%Human multidrug resistance-associated protein,MRP ELISA Kit   人多药耐药相关蛋白兔信号传导转录激活因子5A(STAT5A)酶联吸附测定试剂盒

二马来酐 98%Human high mobility group protein 17,HMG-17 ELISA Kit  人高速泳动蛋白17兔白介素3介导核因子(NFIL3)酶联吸附测定试剂盒

2,6-二对醌 98%Human Vacuolating cytotoxin A,VacA ELISA Kit  人空泡素相关蛋白A兔τ-蛋白激酶1(τPK1)酶联吸附测定试剂盒

1,3-二羟酮,二聚体 97%Human vitronectin,VNR ELISA Kit  人玻连蛋白/体外粘连蛋白兔神经丝蛋白3(NEF3)酶联吸附测定试剂盒

4,4'-二二 98%Human vimentin,VIM ELISA Kit  人波形蛋白兔髓样前体抑制因子2(MPIF2)酶联吸附测定试剂盒

2,5-二 98%Human Surfactant Protein D,SP-D ELISA Kit  人表面活性蛋白D兔纤维蛋白原α(FGα)酶联吸附测定试剂盒

2,4-二磺，水合 98%Human arabinogalactan proteins,AGPs ELISA Kit  人阿拉伯半糖蛋白兔激肽原1(KNG1)酶联吸附测定试剂盒

二乙二单 GR,99.0%Human Beta Lactoglobulin, Beta-Lg ELISA Kit  人β球蛋白兔结缔组织生长因子(CTGF)酶联吸附测定试剂盒

二十二烷 standard for GC，≥99.0% (GC)Human Beta catenin, Beta-Cat ELISA Kit  人β连环蛋白/联蛋白兔半凝集素7(GAL7)酶联吸附测定试剂盒

二十二烷 99%Human Beta amyloid precursor protein, BetaAPP ELISA Kit  人淀粉样前体蛋白兔表皮生长因子受体(EGFR)酶联吸附测定试剂盒

三十二烷 standard for GC, ≥98.0% (GC) Human beta2 glycoprotein, Beta2-GP ELISA Kit  人β2糖蛋白兔解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)酶联吸附测定试剂盒  
QGY-7701细胞超氧阴离子自由Elisa试剂盒生物素标记的兔抗猴IgMNAT10  乙酰转移酶10抗体

心脏肌球蛋白结合蛋白CElisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗猴IgMNARG2  谷氨受体调节蛋白2抗体

无翅型MMTV整合位点家族成员2Elisa试剂盒胶体金标记的兔抗猴IgMNARF  核纤层蛋白A识别因子抗体

血小板膜糖蛋白纤维蛋白原受体Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的兔抗猴IgMNAPSIN A/ASP4  天冬氨蛋白酶ASP4抗体

饥饿素-O-乙酰转移酶Elisa试剂盒FITC标记的兔抗猴IgMNAP1L2  脑特异性蛋白BPX抗体

2',5'-寡腺苷合成酶1Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗猴IgMNAP1L1  核小体组装蛋白1抗体

脂肪结合蛋白4Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗小鼠IgGNanos3  骨巢蛋白抗体

Sushi重复含蛋白质连锁2Elisa试剂盒胶体金标记的兔抗小鼠IgGNANOS2  增殖相关蛋白NANOS2抗体

性别决定区Y框蛋白9Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗小鼠IgGNANOGP8  干转录因子NANOGP8抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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