SNU-423细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：肝癌细胞；SNU-423
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
4-溴-2-氟 97%human ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,U-TSH ELISA Kit  人高灵敏度促状腺兔广谱角蛋白(P-CK)酶联吸附测定试剂盒

1-溴-2-萘酚 98%human dopamine,DA ELISA KIT  人多巴兔补体因子P(CFP)酶联吸附测定试剂盒

3-溴喹啉 98%human Azidothymidine,AZT ELISA Kit  人叠氮胸苷兔玻连蛋白(VTN)酶联吸附测定试剂盒

1-溴-4--2- 99%human adrencocorticotropic hormone,ACTH ELISA Kit  人促肾上腺皮质兔血管内皮生长因子C(VEGF-C)酶联吸附测定试剂盒

双(三膦)氢化亚铜 90%human corticotropin releasing hormone,CRH ELISA Kit  人促肾上皮质释放兔素β(LTβ)酶联吸附测定试剂盒

 standard for GC, ≥99.9% (GC)Human Thyroglobulin,TG ELISA Kit  人状腺球蛋白兔F-框蛋白2(FBXO2)酶联吸附测定试剂盒  

  99.8%,无水级Human Eukaryotic translation initiation factor 3a,eIF3a ELISA Kit  人真核翻译起始因子3a兔抗补体1q抗体(C1q-Ab)酶联吸附测定试剂盒  

(2S, 4S)-4-二膦-2-(二膦)-1-特丁氧羰吡咯烷 97%Human phospho-extracellular signal-regulated kinase,pERK ELISA Kit  人化外信号调节激酶兔Smad同源物7 (Smad7/MADH7)酶联吸附测定试剂盒

N,O-双(硅烷)三氟乙酰 for GC, ≥99.0% (GC)Human phospholamban,PLN ELISA Kit  人受蛋白兔胎盘催素(PL)酶联吸附测定试剂盒

右旋龙脑 98%Human tumour necrosis factor related weak inducer of apoptosis,TWEAK ELISA Kit  人肿瘤坏死因子相关弱凋亡诱导因子兔素β受体(LTβR)酶联吸附测定试剂盒

变色2B 97%Human IPO-38 ELISA Kit  人IPO-38蛋白兔L-脱氢酶(L-LDH)酶联吸附测定试剂盒

3--4-氟 98%human excision repair cross-complementation group 1,ERCC1 ELISA kit  人切除修复交叉互补因1兔CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)酶联吸附测定试剂盒

硫亚铈八水 99.9% metals basisHuman Protein Carbonyl,PC ELISA Kit   人羰化蛋白兔糖皮质受体α(GRα)酶联吸附测定试剂盒

硫亚铈八水 99.999% metals basishuman phospho-inhibitory subunit of NF-κB Alpha,pIKB Alpha ELISA kit  人化核因子κB抑制蛋白α（IKKα human ELISA kit）兔补体成分9(C9)酶联吸附测定试剂盒  

环十二酮 99%Human paxillin,Pax ELISA Kit  人桩蛋白兔Pirin蛋白(PIR)酶联吸附测定试剂盒
SNU-423细胞水痘带状疱疹病Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗人型IgANEK8  丝氨/苏氨蛋白激酶NEK8抗体

流行性腮腺炎病Elisa试剂盒Alexa Fluor 647标记的兔抗人型IgANEK7  丝氨/苏氨蛋白激酶Nek7抗体

半胱氨丰富蛋白3Elisa试剂盒APC标记的兔抗人型IgANEK6  高度相似的周期蛋白激酶NEK6抗体

前列腺素4Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的兔抗人型IgANEK3  丝氨/苏氨蛋白激酶Nek3抗体

骨髓质抗原1Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的兔抗人型IgANEK2  中心体相关蛋白激酶Nek2抗体

L-色Elisa试剂盒Cy5标记的兔抗人型IgANEK1  丝氨/苏氨蛋白激酶NEK1抗体

H1N1流感IgA抗体Elisa试剂盒Cy5.5标记的兔抗人型IgANEGR1  神经生长调节蛋白1抗体

H1N1流感IgG抗体Elisa试剂盒Cy7标记的兔抗人型IgANEEP21  NEEP21蛋白抗体

H1N1流感IgM抗体Elisa试剂盒PE标记的兔抗人型IgANEDD8  泛素样蛋白NEDD8抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。