BEL/FU细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：肝癌氟尿嘧啶耐药株
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI-1640

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
3-溴酮乙酯 90%CS ELISA Kit  大鼠柠檬合酶兔脂酶B(PLB)酶联吸附测定试剂盒

4-乙酯 99%L-LDH ELISA Kit   大鼠L-鼠脱氢酶兔脂酶D2(PLD2)酶联吸附测定试剂盒

乙氧乙炔,己烷溶液 40 wt%己烷溶液ACS ELISA Kit  大鼠脂酰辅酶A合成酶兔化外信号调节激酶(pERK)酶联吸附测定试剂盒

3-乙 99%CACT ELISA Kit  大鼠肉碱脂酰转移酶兔球蛋白G Fc段低亲和力受体IIIb(FcγR3B)酶联吸附测定试剂盒

N-乙苄 97%pACCase ELISA Kit  大鼠化乙酰辅酶A羧化酶兔肌球蛋白轻链激酶(MLCK/MYLK)酶联吸附测定试剂盒

乙烯利  >90.0%(HPLC)MT ELISA Kit  大鼠金属硫蛋白兔生长分化因子10(GDF10)酶联吸附测定试剂盒

乙烯利 80%c ELISA Kit  大鼠心肌特异性肌钙蛋白T兔相关浆蛋白A(PAPPA)酶联吸附测定试剂盒

对乙酯 98%AChE ELISA Kit   大鼠乙酰胆碱酯酶兔球蛋白A2 (IgA2)酶联吸附测定试剂盒

1,2-环氧辛烷 97%CDT ELISA Kit   大鼠糖缺失性转铁蛋白兔核孔蛋白98kda(NUP98)酶联吸附测定试剂盒

4-乙炔吡啶盐盐 97%TBA ELISA Kit   大鼠总胆汁兔cAMP反应元件结合蛋白(CREB)酶联吸附测定试剂盒

DL-乙硫氨 98%BMG/ Beta2-MG ELISA Kit  大鼠β2微球蛋白兔硫褪黑色素(MS)酶联吸附测定试剂盒

无水化铒 99.9% metals basisRBP ELISA Kit  大鼠视黄结合蛋白兔脂联素受体2(ADIPOR2)酶联吸附测定试剂盒

D(+)岩藻糖 99%GNRHR-Ab ELISA Kit  大鼠促性腺释放受体抗体兔载脂蛋白B100(ApoB100)酶联吸附测定试剂盒

2'-氟乙酮 98%MBP ELISA Kit   大鼠主要碱性蛋白兔丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶联吸附测定试剂盒

氟-1,1,1,3,3,3-六氟异 98%ECP ELISA Kit  大鼠嗜性粒阳离子蛋白兔生长分化因子9(GDF9)酶联吸附测定试剂盒
BEL/FU细胞己烷雌酚Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的兔抗大鼠IgGMYCBP2  MYC结合蛋白2抗体

假尿苷合酶1Elisa试剂盒Cy3标记的兔抗大鼠IgGMYBPC3  心脏肌球蛋白结合蛋白抗体

β-羟类固脱氢酶2Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的兔抗大鼠IgGMYBPC1  肌球蛋白结合蛋白C抗体

U3小核糖核蛋白IMP3Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的兔抗大鼠IgGMYBBP1A/p53 activated protein 2  p53激活蛋白2抗体

畸胎瘤源性生长因子Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗大鼠IgGMX2/MXB  干扰素诱导GTP结合蛋白MX2抗体

封闭蛋白5Elisa试剂盒辣根过氧化物酶标记的兔抗大鼠IgGMVK  羟戊激酶抗体

超敏心肌肌钙蛋白ⅠElisa试剂盒FITC标记的兔抗大鼠IgGMVD  羟戊脱羧酶抗体

谷氨酰合成酶Elisa试剂盒胶体金标记的兔抗大鼠IgGMUSK  肌肉骨骼受体酪氨激酶抗体

幽门螺杆尿素酶抗体Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗大鼠IgGMusashi 1/Msi1  神经干RNA结合蛋白Musashi1抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。