NCI-H441细胞

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产品名称：肺腺癌细胞；NCI-H441
形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：NCI-H441建系于1982年（A.F.Gazdar，etal.)。该细胞分离自一名肺腺癌患者的心包液。该细胞能在半固体琼脂糖中形成克隆，并能表达肺泡表面活性蛋白A。该细胞在有血清培养基中倍增时间为58小时，在无血清培养基中倍增时间为99-138小时。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1:3传代,2-3天传一代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

酮 90%HSF1 ELISA Kit  大鼠热休克因子1兔白介素18(IL-18)酶联吸附测定试剂盒

氢醌-О，О'-二乙 98%BetaOHB ELISA Kit  大鼠β羟丁兔性神经鞘脂酶(ASM)酶联吸附测定试剂盒

组 96%CYP450 ELISA Kit  大鼠色素P450兔防御素α5(DEFα5)酶联吸附测定试剂盒

2-己噻吩 98%GHRP-Ghrelin ELISA Kit   大鼠生长释放肽ghrelin兔激肽释放酶8(KLK8)酶联吸附测定试剂盒

反-3-己烯-1- 97%vaspin ELASA Kit  大鼠内脏脂肪特异性丝氨蛋白酶抑制剂兔黑素瘤衍生亮氨拉链额外核因子(MLZE)酶联吸附测定试剂盒

碳化铪 99.5%，Zr <1% ，325目BrdU ELISA Kit   大鼠溴脱氧核苷尿嘧啶兔C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)酶联吸附测定试剂盒

乙内酰脲-5-乙 98%TGF Beta2 ELISA Kit  大鼠转化生长因子β2兔黄体**素释放(LHRH/GnRH)酶联吸附测定试剂盒

4-(2-羟乙)吡啶 98%CYP2E1 ISA Kit   大鼠色素P4502E1兔核转录因子Y亚γ(NFYC)酶联吸附测定试剂盒

3-羟乙炔 97%Alpha1-MG ELISA Kit  大鼠α1微球蛋白兔CD163分子(CD163)酶联吸附测定试剂盒

2-羟-4,6-二氧乙酮 98%MCP-4/CCL13 ELISA Kit   大鼠单核趋化蛋白4兔促有丝分裂因子(MF/MPF)酶联吸附测定试剂盒

2-羟-2-(三氟) 94%PPAR- Alpha ELISA Kit  大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α兔心肌肌钙蛋白T(c/TNNT2)酶联吸附测定试剂盒  

反式-2-羟肉桂 97%CAM ELISA Kit   大鼠钙调素兔肺表面活性物质相关蛋白C(SPC)酶联吸附测定试剂盒

2-羟-5-氧 98%Apo-E ELISA Kit  大鼠载脂蛋白E兔C4结合蛋白α(C4BPα)酶联吸附测定试剂盒

2-羟-6-烟 98%omentin ELISA Kit  大鼠网膜素兔D-脱氢酶(D-LDH)酶联吸附测定试剂盒  

3-己炔-2-酮 97%OFQ/N ELISA Kit  大鼠孤腓肽兔脱氢表雄酮硫酯(DHEA-S)酶联吸附测定试剂盒 
NCI-H441细胞人型卷曲相关蛋白5Elisa试剂盒PE-Cy5.5标记的兔抗猪IgGMT-ND1  NADH复合体1抗体

凋亡加强结构域蛋白8Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的兔抗猪IgGMTMR8  肌管素相关蛋白8抗体

乙酰化高迁移族蛋白Elisa试剂盒FITC标记的兔抗猪IgGMTMR14  肌管素相关蛋白14抗体

尾肢同源蛋白2Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗猪IgGMTM1/Myotubularin  肌微管素1抗体

胃生长素Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的兔抗猪IgGMTLR  胃动素受体抗体

CD69分子Elisa试剂盒Alexa Fluor 350标记的兔抗猪IgGMTLC  致癌因抗体

血管加压素Elisa试剂盒Cy5.5标记的兔抗长爪沙鼠IgGMTHFR  亚四氢叶还原酶MTHFR抗体

簇集蛋白Elisa试剂盒Cy7标记的兔抗长爪沙鼠IgGMTGR1  髓易位因相关蛋白1抗体

组织因子途径抑制物1Elisa试剂盒罗丹明标记的兔抗长爪沙鼠IgGMTFR1  线粒体裂变调节蛋白1抗体