SK-N-DZ细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：成神经瘤细胞-骨髓；SK-N-DZ
生长特性：贴壁生长

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
异丁 ACS光谱级, ≥99.0%AZT ELISA Kit  大鼠叠氮胸苷兔成纤维生长因子6(FGF6)酶联吸附测定试剂盒

棕榈对酯 98%DA ELISA Kit  大鼠多巴兔二氢嘧啶酶样蛋白3(DPYSL3)酶联吸附测定试剂盒

1-硝萘 99%U-TSH ELISA Kit  大鼠高灵敏度促状腺兔脂肪分化相关蛋白(ADRP)酶联吸附测定试剂盒

橙花   97%u-T4 ELISA Kit  大鼠高敏状腺素兔血小板亲和蛋白2(PKP2)酶联吸附测定试剂盒

橙花   FCC, ≥97%GAD-Ab ELISA Kit  大鼠谷氨脱羧酶自身抗体兔α清蛋白(α-La)酶联吸附测定试剂盒

1-萘 98%PTHrP ELISA Kit   大鼠状旁腺相关蛋白兔谷氨脱氢酶(GDH/GLDH)酶联吸附测定试剂盒  

6-并咪唑 98%ACA-IgG ELISA Kit  大鼠抗心脂抗体IgG兔酪氨酶(TYR)酶联吸附测定试剂盒

4-(4-硝苄)吡啶 98%ACA-IgM ELISA Kit  大鼠抗心脂抗体IgM兔补体1抑制因子(C1INH)酶联吸附测定试剂盒  

2-酰 96%ACA-IgA ELISA Kit  大鼠抗心脂抗体IgA兔质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)酶联吸附测定试剂盒

五化铌 99.9%，-100 目粉末, 氩气封装AP12 ELISA Kit  大鼠apelin 12兔肿瘤相关抗原(TAA)酶联吸附测定试剂盒

壬 98%IFN- Alpha ELISA Kit  大鼠α干扰素兔β2微球蛋白(BMG/β2-MG)酶联吸附测定试剂盒

溴化镍 99%大鼠的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit  大鼠的牛血清白蛋白残留检测兔血小板因子4(PF4)酶联吸附测定试剂盒

铌粉 99.95% metals basis,325目F II ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅱ兔α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)酶联吸附测定试剂盒

α-萘酚醌烷 90%ET ELISA Kit  大鼠内素兔色素P450家族成员1A2(CYP1A2)酶联吸附测定试剂盒

1-萘 98%PPAR- Gamma ELISA Kit  大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ兔低分子量角蛋白(CK-LMW)酶联吸附测定试剂盒
SK-N-DZ细胞L-肌肽Elisa试剂盒胶体金标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Cy7  Cy7标记的小鼠抗大鼠IgG

含WD重复域蛋白89Elisa试剂盒碱性酶（AP）标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的小鼠抗大鼠IgG

巴尔通体IGG抗体Elisa试剂盒罗丹明标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Cy5  Cy5标记的小鼠抗大鼠IgG

巴尔通体IGM抗体Elisa试剂盒Alexa Fluor 488标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Cy3  Cy3标记的小鼠抗大鼠IgG

胸腺因子Elisa试剂盒Cy5.5标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Bio  生物素标记的小鼠抗大鼠IgG

轻肽神经丝蛋白Elisa试剂盒Cy7标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/APC  APC标记的小鼠抗大鼠IgG

蔗糖酶异麦芽糖酶Elisa试剂盒PE标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/AP  碱性酶（AP）标记的小鼠抗大鼠IgG

蔗糖酶异麦芽糖酶Elisa试剂盒PE-Cy3标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的小鼠抗大鼠IgG

硫酯酶1Elisa试剂盒PE-CY5标记的驴抗羊IgGMouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的小鼠抗大鼠IgG
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。