MHCC97-L细胞

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产品名称：低转移肝癌细胞；MHCC97-L
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：来源于中山医院，生长较缓慢

培养条件：DMEM/F12+10%FBS

传代方法：1：2传代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

钨 94%CT-1 ELISA Kit  大鼠心肌营养素1兔XC趋化因子受体1(XCR1)酶联吸附测定试剂盒

4-戊炔-1- 97%Alpha-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit  大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA兔微量转铁蛋白(MTF)酶联吸附测定试剂盒

五氟酚 99%Lp- Alpha ELISA Kit  大鼠脂蛋白α兔α肌动蛋白(α Actin)酶联吸附测定试剂盒

吡啶-2，5-二羧 98%F VIII -Ag ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅷ相关抗原兔催产素受体(OTR)酶联吸附测定试剂盒

酯 99%FIX ELISA Kit  大鼠凝血因子IX兔胰岛素样蛋白3(INSL3)酶联吸附测定试剂盒

1--1-丁炔 99%F X ELISA Kit  大鼠凝血因子Ⅹ兔胰腺再生蛋白3γ(REG3γ)酶联吸附测定试剂盒

1--1-炔 99%VWF ELISA Kit  大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子兔GTP酶活化蛋白(GAP)酶联吸附测定试剂盒  

2--2- 97%PAP ELISA Kit  大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物兔钙非依赖性脂酶A2(iPLA2)酶联吸附测定试剂盒

2-(氨)吡啶 99%TAT ELISA Kit  大鼠凝血酶抗凝血酶复合物兔成纤维生长因子4(FGF4)酶联吸附测定试剂盒

氧化镨(III) 99.9% metals basisATR ELISA Kit  大鼠抗凝血酶受体兔组织蛋白酶D(CTSD)酶联吸附测定试剂盒  

钼 AR,98.0 %TR ELISA Kit  大鼠凝血酶受体兔天门冬氨氨转移酶(AST)酶联吸附测定试剂盒

钼 99.9%cTn- I ELISA Kit  大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ兔晚期糖化终末产物受体(AGER)酶联吸附测定试剂盒  

乙酯 99%PI3K ELISA Kit  大鼠肌3激酶兔生长分化因子6(GDF6)酶联吸附测定试剂盒

非那西汀 ≥98.0% (HPLC)PKB ELISA Kit  大鼠蛋白激酶B兔纤维蛋白原β(FGβ)酶联吸附测定试剂盒

双(硅烷)氨 0.7M in toluene(15%溶液)sIgA ELISA Kit  大鼠型球蛋白A兔II型胶原交联羧端肽(CTX-II)酶联吸附测定试剂盒
MHCC97-L细胞趋化因子配体27Elisa试剂盒Cy5.5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的小鼠抗兔IgG

3-溴酪氨Elisa试剂盒Cy7标记的鼠抗人IgG单克隆抗体Mouse Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的小鼠抗兔IgG

间变性瘤激酶Elisa试剂盒Cy3标记的鼠抗人IgG单克隆抗体Mouse Anti-rabbit IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的小鼠抗兔IgG

球蛋白抗体Elisa试剂盒Cy5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体Mouse Anti-rabbit IgG/PE  PE标记的小鼠抗兔IgG

氨肽酶NElisa试剂盒Mouse Anti-rabbit IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的小鼠抗兔IgG

内皮微粒水平Elisa试剂盒Mouse Anti-rabbit IgG/Gold  胶体金标记的小鼠抗兔IgG

神经酰酶Elisa试剂盒Mouse Anti-rabbit IgG/FITC  FITC标记的小鼠抗兔IgG

前脑钠素Elisa试剂盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7标记的小鼠抗兔IgG

紧密连接蛋白2Elisa试剂盒Mouse Anti-rabbit IgG/Cy5.5  Cy5.5标记的小鼠抗兔IgG