实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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Changliver细胞
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T25
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FS-X3297
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产品名称：张氏肝细胞；Changliver
形态特性：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：张氏肝细胞1954年从非恶性的人体组织中建立。广泛应用于病毒学、生化和恶性肿瘤相关的转移研究。
培养条件：RPMI1640+10%FBS
传代方法：消化CQ-5分钟。1:2。3天内可长满。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
4-吡啶硫脲 98%SP ELISA Kit 大鼠P物质兔型球蛋白A(sIgA)酶联吸附测定试剂盒
邻-(2,3,4,5,6-五氟苄)羟盐盐 99%,用于GCAFU ELISA Kit 大鼠αL岩藻糖苷酶兔高尔蛋白73(GP-73)酶联吸附测定试剂盒
DL-3--2-羟 ≥98.0%TPO ELISA Kit 大鼠状腺过氧化物酶兔过氧化物酶体膜蛋白3(PMP3)酶联吸附测定试剂盒
4-氧磺酰 97%PI ELISA Kit 大鼠胰岛素兔血管舒缓激肽(BK)酶联吸附测定试剂盒
(S)-(-)-1-乙 99%大鼠抗IgE受体抗体ELISA Kit 大鼠抗IgE受体抗体兔尿嘧啶核苷化酶1(UPP1)酶联吸附测定试剂盒
3-戊二 98%大鼠抗IVIgG抗体ELISA Kit 大鼠抗IVIgG抗体兔半凝集素4(GAL4)酶联吸附测定试剂盒
炔 97%P53 ELISA Kit 大鼠P53兔胰腺再生蛋白3α(REG3α)酶联吸附测定试剂盒
DL-青霉 98+%cGMP ELISA Kit 大鼠环鸟苷兔心肌钙黏蛋白(H-Cadherin)酶联吸附测定试剂盒
DL-青霉 GRNOS ELISA Kit 大鼠一氧化氮合成酶兔色素P450家族成员1A1(CYP1A1)酶联吸附测定试剂盒
2-(1-) 97%iNOS ELISA KIT 大鼠诱导型一氧化氮合成酶兔质金属蛋白酶-13(MMP-13)酶联吸附测定试剂盒
喹啉-2- 98%eNOS ELISA Kit 大鼠内皮型一氧化氮合成酶兔低密度脂蛋白受体(LDLR)酶联吸附测定试剂盒
D-(-)-奎尼 分析标准品，≥98%Lp-PL-A2 ELISA Kit 大鼠脂蛋白脂酶A2兔端锚聚合酶2 (TNKS2)酶联吸附测定试剂盒
喹啉-5-羧 98%HSP-90 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白90兔甘露糖受体C2 (MRC2)酶联吸附测定试剂盒
利英钠克盐 ARHSP-70 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白70兔甘露聚糖结合凝集素相关丝氨蛋白酶(MASP)酶联吸附测定试剂盒
利英钠克盐 ACSHSP-40 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白40兔髓鞘少突胶质糖蛋白(MOG)酶联吸附测定试剂盒
Changliver细胞蓝氏贾弟鞭毛虫IGG抗体Elisa试剂盒β淀粉样肽1-28（多肽蛋白）Mouse anti-rabbit IgG ascites 小鼠抗兔IgG腹水
20-a羟孕酮Elisa试剂盒β淀粉样肽（1-40）（多肽蛋白）Mouse Anti-rabbit IgG 小鼠抗兔IgG
H5N1-IgG抗体Elisa试剂盒突变型β淀粉样肽1-40Mouse Anti-human IgM/RBITC 罗丹明标记的小鼠抗人IgM
H5N1-IgM抗体Elisa试剂盒β淀粉样肽（1-42）Mouse Anti-human IgM/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗人IgM
KH型剪接调节蛋白Elisa试剂盒糖尿病相关肽（胰岛淀粉样肽）Mouse Anti-human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgM
星状病IGM抗体Elisa试剂盒瓜氨环肽Mouse Anti-human IgM/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗人IgM
肌腱蛋白NElisa试剂盒2型猪链球体蛋白Mouse Anti-human IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗人IgM
肌腱蛋白XElisa试剂盒胰高血糖素样肽-1（多肽）Mouse Anti-human IgM/PE PE标记的小鼠抗人IgM
神经生长因子诱导蛋白BElisa试剂盒肾上腺髓质素蛋白(N端20肽)Mouse Anti-human IgM/HRP 辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgM
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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