实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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THP-1细胞
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T25
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FS-X3309
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产品名称：单核细胞白血病；THP-1
形态特性：单核细胞
生长特性：悬浮生长
特征特性：该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞，细胞膜和胞浆内均没有球蛋白，表达C3R和FcR；可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化；可作为转染宿主。
培养条件：RPMI1640+0.05mM2-硫基乙醇+10%FBS
传代方法：维持细胞浓度在2~4×105~8×105/ml，勿超过1×106/ml；2~3天换液1次。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果��
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
柚皮苷 95%TIMP-3 ELISA Kit 大鼠质金属蛋白酶抑制因子3豚鼠VII型胶原(COL7)酶联吸附测定试剂盒
柚皮素 分析标准品，≥98%TIMP-4 ELISA Kit 大鼠质金属蛋白酶抑制因子4豚鼠结合珠蛋白(HP)酶联吸附测定试剂盒
齐墩果 分析标准品，>98%TNFsR- I ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ豚鼠促黄体**(LH)酶联吸附测定试剂盒
齐墩果 97%TNFsR- II ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ豚鼠吡哆激酶(PDXK)酶联吸附测定试剂盒
延胡索乙素 分析标准品，≥98%（HPLC)TNF- Beta ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子β豚鼠骨桥素(OPN)酶联吸附测定试剂盒
D(-)-水杨苷 98%TRAIL-R3 ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3豚鼠末端脱氧核糖核转移酶(TDT)酶联吸附测定试剂盒
D(-)-水杨苷 分析标准品，≥98%TRAIL-R1 ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1豚鼠Runt相关转录因子2(RUNX2)酶联吸附测定试剂盒
(-)-莽草 98%TRAIL-R4 ELISA Kit 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4豚鼠胆碱甘油酯(PC/CPG)酶联吸附测定试剂盒
辛弗林 分析标准品，≥98%sTRAIL ELISA Kit 大鼠可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体豚鼠不均一核糖核蛋白U (HNRPU)酶联吸附测定试剂盒
辛弗林 98%uPA ELISA Kit 大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物豚鼠蛋白激酶C-θ(PKCθ)酶联吸附测定试剂盒
槐角苷 分析标准品，98%PLAUR/uPAR ELISA Kit 大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体豚鼠白血病抑制因子(LIF)酶联吸附测定试剂盒
甜橙黄酮 90%IL-12/P70 ELISA Kit 大鼠白介素12豚鼠内皮素1(ET-1)酶联吸附测定试剂盒
延胡索乙素 分析标准品，>97%VEGF-B ELISA Kit 大鼠血管内皮生长因子B豚鼠Rap鸟嘌呤交换因子1(RAPGEF1)酶联吸附测定试剂盒
熊果 分析标准品，≥98.5%IL-12/P40 ELISA Kit 大鼠白介素12豚鼠内肽2(EM2)酶联吸附测定试剂盒
糊精 ARVEGF-C ELISA Kit 大鼠血管内皮生长因子C豚鼠脑素受体(CNR1)酶联吸附测定试剂盒
THP-1细胞钙通道抗体Elisa试剂盒ABL1抗原Mouse anti-Goat IgG ascites 小鼠抗羊IgG腹水
肌球蛋白重链抗体Elisa试剂盒α-L岩藻糖苷酶抗原Mouse Anti-Goat IgG 小鼠抗羊IgG
3-葡萄糖苷孕二Elisa试剂盒Mouse anti-Bovine IgG ascites 小鼠抗牛IgG腹水
激活STAT蛋白抑制因子2aElisa试剂盒Bax（多肽抗原）Mouse Anti-Bov IgG/RBITC 罗丹明标记的小鼠抗牛IgG
下视丘素Elisa试剂盒荧光素FITC标记瘦素抗原Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗牛IgG
整合素α9β1Elisa试剂盒Bcl-2（多肽抗原）Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗牛IgG
癌胚抗原相关粘附分子16Elisa试剂盒脑源神经营养因子(脑衍化神经营养因子)（多肽片断抗原）Mouse Anti-Bov IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗牛IgG
HLA特异性IgG抗体Elisa试剂盒拟南芥ACA11蛋白多肽抗原Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的小鼠抗牛IgG
S-腺苷蛋氨Elisa试剂盒植物蛋白AHA3抗原（拟南芥）Mouse Anti-Bov IgG/PE PE标记的小鼠抗牛IgG
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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