HT1080细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：纤维肉瘤细胞；HT1080
形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：这株细胞含有活化的N-ras癌基因。

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
交联聚乙烯吡咯烷酮 USP级Cav-1 ELISA Kit  大鼠窖蛋白Caveolin1豚鼠α2纤溶酶抑制因子(α2-PI)酶联吸附测定试剂盒

乙烯吡咯烷酮-乙乙烯酯共聚 50%乙溶液（共聚物Copolymer, VEGF ELISA KIT   大鼠血管内皮生长因子豚鼠二氢硫辛转乙酰酶(DLAT)酶联吸附测定试剂盒

乙烯吡咯烷酮-乙乙烯酯共聚 50%乙溶液（共聚物Copolymer, TNF- Alpha ELISA KIT  大鼠肿瘤坏死因子α豚鼠葡萄糖-6-脱氢酶(G6PD)酶联吸附测定试剂盒

乙乙烯酯 average Mw ~50,000 (GPC vs. poly(ethylene oxide))TGF- Beta1 ELISA kit  大鼠转化生长因子β1豚鼠成纤维生长因子受体2(FGFR2)酶联吸附测定试剂盒

聚乙烯吡咯烷酮络合物 试剂级SCF/MGF ELISA Kit  大鼠干因子/肥大生长因子豚鼠钙网蛋白(CRT)酶联吸附测定试剂盒

聚乙烯吡咯烷酮 平均分子量 58000, K29-32 NADPH ELISA Kit  大鼠烟酰腺嘌呤二核苷豚鼠降钙素受体(CTR)酶联吸附测定试剂盒

2-吡咯烷酮 99%PDGF-AB ELISA Kit  大鼠血小板衍生生长因子AB豚鼠趋化因子(Lptn/XCL1)酶联吸附测定试剂盒

N-乙烯吡咯烷酮 包含 100 ppm NaOH 稳定剂, 99%PDGFsR- Alpha ELISA Kit  大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α豚鼠对氧酶1(PON1)酶联吸附测定试剂盒

溴 CP，98.5%NT-4 ELISA Kit  大鼠神经营养因子4豚鼠胱天蛋白酶14(CASP14)酶联吸附测定试剂盒

2-烟 98%NT-3 ELISA Kit  大鼠神经营养因子3豚鼠心肌钙黏蛋白(H-Cadherin)酶联吸附测定试剂盒

4，4'-亚双(异酯) 98%NGF ELISA Kit  大鼠神经生长因子豚鼠角化内因子(KAF)酶联吸附测定试剂盒

乙烯 CP,含10-15ppm 4-叔-丁邻二酚稳定剂MIP-3 Alpha/CCL20 ELISA Kit  大鼠巨噬炎性蛋白3α豚鼠诱导型一氧化氮合成酶(NOS2/iNOS)酶联吸附测定试剂盒

二异酯 98%（剧品）LN ELISA Kit  大鼠层连蛋白/板层素豚鼠白介素2受体β(IL-2Rβ)酶联吸附测定试剂盒

硫辛 分析标准品，≥98%IL-6 ELISA KIT   大鼠白介素6豚鼠外信号调节激酶3(ERK3)酶联吸附测定试剂盒

硫庆大霉素 USP级IL-4 ELISA KIT   大鼠白介素4豚鼠补体因子P(CFP)酶联吸附测定试剂盒
HT1080细胞Bcl2相关抗凋亡因6Elisa试剂盒鳞状癌抗原MMP-16  质金属蛋白酶-16抗体

转化受体电位阳离子通道亚家族V成员1Elisa试剂盒内皮素-1(多肽抗原)MMP-15  质金属蛋白酶-15抗体

骨形成蛋白 24Elisa试剂盒内皮素-1（抗原）MMP-14  质金属蛋白酶-14抗体

蛋白因产物9.5Elisa试剂盒内质网Aβ相关结合蛋白（抗原）MMP-13  质金属蛋白酶13抗体

G抗原7Elisa试剂盒相关血浆蛋白AMMP-12  质金属蛋白酶-12抗体

GBU4-5Elisa试剂盒金属蛋白酶组织抑制因子-1（抗原）MMP-11  质金属蛋白酶-11抗体

癌抗原Elisa试剂盒软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗原MMP-10  质金属蛋白酶-10抗体

逆转录病样天冬氨蛋白酶1Elisa试剂盒植物延展素-β（抗原）MMP-1  质金属蛋白酶-1抗体

n-乙酰胞壁酰-l-氨酰氨酶Elisa试剂盒载脂蛋白-a1MMP-1  质金属蛋白酶-1抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。