实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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HumanWRO细胞
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T25
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FS-X3322
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产品名称：HumanWRO
形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长
培养条件：DMEM+10%FBS
传代方法：1:3传代，2-3天换液一次
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
铋标准溶液 100mg/L，体: 5％HNO3Mouse Beta-catenin, Beta-cat ELISA Kit 小鼠β连环蛋白/联蛋白豚鼠半胱氨酰白三烯受体2(CYSLTR2)酶联吸附测定试剂盒
苄嘧磺隆 分析标准品Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA Kit 小鼠垂体腺苷环化酶激活肽豚鼠心肌肌钙蛋白T(c/TNNT2)酶联吸附测定试剂盒
联标准溶液 10.8ug/ml，体：Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA Kit 小鼠血管紧张素转化酶豚鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联吸附测定试剂盒
3,4-并芘标准溶液 5.25μg/mL，体：Mouse angiotension II ,ANG- II ELISA Kit 小鼠血管紧张素Ⅱ豚鼠脂爬行酶1(PLSCR1)酶联吸附测定试剂盒
灭草松标准溶液 0.100mg/mlMouse keratinocyte autocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit 小鼠角化内因子/双调蛋白豚鼠泛素连接酶E3A (UBE3A)酶联吸附测定试剂盒
硫标准溶液 0.110mg/mlACV-A (Mouse Activin A) ELISA Kit 小鼠活化素A豚鼠延伸蛋白A(EloA)酶联吸附测定试剂盒
硫标准溶液 100μg/ml,u=4%BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor) ELISA Kit 小鼠脑源性神经营养因子豚鼠嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员2(EAR2)酶联吸附测定试剂盒
丁草标准溶液 0.100mg/mlBMP-2(Mouse Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白2豚鼠P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-GP)酶联吸附测定试剂盒
溴螨酯标准溶液 1.00mg/mlBMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白4豚鼠神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)酶联吸附测定试剂盒
并［g,h,i］芘标准溶液 10～100μg/mL，体：IGFBP-6(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6) ELISA kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6豚鼠肌-3-激酶催化亚σ肽(PIK3Cσ)酶联吸附测定试剂盒
钡溶液成分分析标准物质 钡溶液质量浓度(20℃):19.532mg/ml,体MIP-1 Delta(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1 Delta) ELISA kit 小鼠巨噬炎性蛋白1δ豚鼠烯式酮羧激酶1(PCK1)酶联吸附测定试剂盒
钡标准溶液 100mg/L，体: 5%HClPARC(Mouse pulmonary activation regulated chemokine) ELISA Kit 小鼠肺部活化调节趋化因子豚鼠血管**素(ANG)酶联吸附测定试剂盒
铍标准溶液 10μg/mlLZM(Mouse Lysozyme) ELISA Kit 小鼠溶酶豚鼠低密度脂蛋白(LDL)酶联吸附测定试剂盒
标准溶液0.96mg/ml，溶剂：sCD30(Mouse soluble cluster of differentiation 30) Elisa Kit 小鼠可溶性CD30豚鼠球蛋白G Fc段低亲和力受体IIIa(FcγR3A)酶联吸附测定试剂盒
生化需氧量(BOD)标准溶液 1000μg/mlsMHC-2(Mouse soluble myosin heavy chain 2) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重链豚鼠非红血影蛋白β4 (SPTβN4)酶联吸附测定试剂盒
HumanWRO细胞钙调神经酶Elisa试剂盒热休克蛋白-60（抗原）MID1/Midline-1/RNF59 环指蛋白59抗体
固受体Err2Elisa试剂盒热休克蛋白-70（多肽抗原）MICS1 生长诱导跨膜蛋白抗体（源性蛋白2）
糖异构酶Elisa试剂盒衔接蛋白α抗原Microsporidia protien 蜜蜂微孢子虫蛋白抗体
孔肯尼亚病抗原Elisa试剂盒Caspase 激活的脱氧核糖核酶抑制剂（抗原）Microcephalin 1/BRIT1 小脑症因1/认知相关蛋白抗体
心营养素样因子1Elisa试剂盒胰岛素降解酶（抗原）MICB MHC I类链相关蛋白B
铜锌过氧化物岐化酶Elisa试剂盒人胰岛素样生长因子-I受体MICA/MHC I MHC I类链相关蛋白A/组织相容性复合物1抗体
蛋白激酶AElisa试剂盒胰岛素样生长因子结合蛋白-5(抗原)MIC1/C18orf8 结肠癌相关蛋白MIC1抗体
蛋白激酶G-II型Elisa试剂盒胰岛素（抗原）MIA2 黑色素瘤抑制活性蛋白2抗体
丝氨蛋白酶HTRA1Elisa试剂盒APC活化蛋白C抗原MHC Class II/MRC OX-6 组织相容性复合体2抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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