3AO细胞

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产品名称：卵巢癌细胞；3AO
形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

异辛烷/中15种有机农药混合溶液 溶剂:异辛烷/(质量比:CGRP(Mouse calcitonin gene related peptide) ELISA Kit  小鼠降钙素因相关肽豚鼠肾上腺皮质发育异常蛋白(ACD)酶联吸附测定试剂盒

酚标准溶液 1.0mg/ml，体：MTL(Mouse Motilin) ELISA Kit  小鼠胃动素豚鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体(snRNP/Sm)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 1.00mg/mlSS(Mouse Somatostatin) ELISA Kit  小鼠生长抑素豚鼠中期因子(MK)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 1000µg/mL，体:1%HClFbg(Mouse Fibrinogen) ELISA Kit  小鼠血纤蛋白原豚鼠抗心脂抗体IgA(ACA-IgA)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 100µg/mL，体:1%HCl PAF(Mouse plaet activating factor) ELISA Kit  小鼠血小板活化因子豚鼠血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)酶联吸附测定试剂盒

二氢PH标准物质 PH值(25°C)：6.864sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit  小鼠横纹肌辅肌动蛋白α豚鼠水通道蛋白4(AQP-4)酶联吸附测定试剂盒

菲标准溶液 395μg/mL，体:MYS(Mouse Myosin) ELISA Kit  小鼠肌球蛋白豚鼠四旋蛋白30 (TSPAN30)酶联吸附测定试剂盒

扑草净 分析标准品，99.5%MHC I /H-2 I (Mouse major histocompatibility complex I ) ELISA Kit  小鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类豚鼠转运蛋白2(TNPO2)酶联吸附测定试剂盒

对硫标准溶液 1.00mg/mL，体：GATA4Mouse GATA binding protein 4) ELISA Kit  小鼠GATA结合蛋白4豚鼠二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)酶联吸附测定试剂盒

草标准溶液 1.00mg/mlIP-10/CXCL10(Mouse interferon-inducible protein 10) ELISA Kit  小鼠干扰素诱导蛋白10豚鼠核糖核酶抑制因子(RI)酶联吸附测定试剂盒

草甘膦 分析标准品，99.9%ENA-78/CXCL5(Mouse Epithelial neutrophil activating peptide 78) ELISA Kit  小鼠上皮中性粒活化肽78豚鼠肌-3-激酶(PI3K)酶联吸附测定试剂盒

咪鲜安 分析标准品，98.4%OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody) ELISA KIT  小鼠氧化低密度脂蛋白抗体豚鼠酮激酶M2型同工酶(PKM2)酶联吸附测定试剂盒

五酚标准溶液 1.03mg/ml，体：ASMA(Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody) ELISA Kit  小鼠抗平滑肌抗体豚鼠脑型肌激酶(CKB)酶联吸附测定试剂盒

化 分析标准品，99.98%M30(Mouse Embryonic Stem MESPU30) ELISA Kit  小鼠胚胎干系MESPU30豚鼠速激肽受体2(TACR2)酶联吸附测定试剂盒

化 分析标准品，K（99.97%）/Cl（100.00%）NF-κB p65(Mouse nuclear factor-κB p65) ELISA Kit  小鼠核因子κB亚p65亲和肽豚鼠G蛋白β1(GNβ1)酶联吸附测定试剂盒
3AO细胞盐转运三腺苷酶抗体Elisa试剂盒素（抗原）MAP7D1/RPRC1  精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗体

渗调蛋白Elisa试剂盒素受体（抗原）MAP65/ASE 1  拟南芥MAP65蛋白抗体

水杨Elisa试剂盒激酶信号-1抑制剂（抗原）MAP4K6/MINK1  丝裂原活化蛋白激酶MAP4K6抗体

水杨酯Elisa试剂盒心肌肌凝蛋白多肽MAP4K4  丝裂原活化蛋白激酶MAP4K4抗体

丝氨羟转移酶Elisa试剂盒核突触蛋白（抗原）MAP4K1  造血祖激酶1抗体

丝裂原激活的蛋白激酶;MAP激酶Elisa试剂盒核突触蛋白（抗原）MAP4  微管相关蛋白4抗体

甜菜碱Elisa试剂盒癌相关抗原抗原MAP3K9  丝裂原活化蛋白激酶3K9抗体

甜菜碱脱氢酶Elisa试剂盒P物质受体（抗原）MAP3K8/TPL2  丝裂原活化蛋白激酶激酶8抗体

褪黑素Elisa试剂盒化钙介质素抗原MAP3K7IP3  NFKB激活蛋白1抗体

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