U251细胞

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产品名称：神经胶质细胞瘤细胞；U251
形态特性：多角

生长特性：贴壁生长

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法：1：2传代
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

壬 97%VTG ELISA Kit  鲤鱼卵黄蛋白原豚鼠髓鞘相关糖蛋白(MAG)酶联吸附测定试剂盒  

壬 98%GnRH ELISA Kit   鱼类促性腺释放豚鼠胰蛋白酶(TRY)酶联吸附测定试剂盒

季戊四 AR,98.0%Fish Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit  鱼类状腺原氨豚鼠抗原6复合物因座A(Ly6a)酶联吸附测定试剂盒

乙二  99.4%Fish Cortisol ELISA Kit  鱼类皮质豚鼠色素P450氧化还原酶(CPR)酶联吸附测定试剂盒

三钠 97%Fish high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit   鱼类超敏C反应蛋白豚鼠TATA框结合蛋白相关因子2(TAF2)酶联吸附测定试剂盒

三 97%Fish Oste ocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit  鱼骨钙素/骨谷氨蛋白豚鼠状腺过氧化物酶(TPO)酶联吸附测定试剂盒

阿斯巴甜 98%Cherax quadricarinatus lipovilin/vilin,Lv/Vn ELISA Kit   红螯光壳螯虾卵黄脂蛋白/卵黄蛋白豚鼠降钙素(CT)酶联吸附测定试剂盒

碳镉 AR,98%Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV ELISA Kit  罗氏沼虾诺达病豚鼠胸腺表达趋化因子(TECK/CCL25)酶联吸附测定试剂盒

碳镉 CP,97%Cobra venom factor,CVF ELISA Kit  蛇因子豚鼠脂酶B(PLB)酶联吸附测定试剂盒

碳镉 99.99%bullfrog growth hormone,GH ELISA Kit  牛蛙生长豚鼠亚四氢叶还原酶(MTHFR)酶联吸附测定试剂盒

铵 CP,98.0%Bombyx mori Livetin,LT ELISA Kit  家蚕卵黄蛋白豚鼠肌联蛋白抗体(TTN)酶联吸附测定试剂盒

苄酯  >99.0%(GC)Nasoniavitripennis vilogenin,Vtg ELISA Kit  蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原豚鼠巨噬趋化因子(MCF)酶联吸附测定试剂盒

 CP,98.5%Plant phosphatidylglycerol,PG ELISA Kit  植物脂酰甘油豚鼠纤维胶凝蛋白1(FCN1)酶联吸附测定试剂盒

 >99% (GC)Plant zeatin riboside,ZR ELISA Kit  植物玉米索核苷豚鼠胃动蛋白1(GKN1)酶联吸附测定试剂盒

酰 AR,99.0%Plant Gibberellic Acid,GA ELISA Kit  植物赤霉素豚鼠CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)酶联吸附测定试剂盒
U251细胞植Elisa试剂盒少突胶质跨膜蛋白抗原LHR/CGR  促黄体**素受体抗体

原花青素Elisa试剂盒紧密连接蛋白1抗原(C端)LHR/CGR  促黄体**素受体抗体

生长Elisa试剂盒前列腺素氧化环化酶1抗原LH beta  促黄体**素抗体

麦芽糖酶Elisa试剂盒肉碱棕榈酰转移酶1A多肽抗原LH  人促黄体**素抗体

ATP合成酶Elisa试剂盒二氢嘧啶酶样2CRMP2抗原LH  促黄体**素抗体

漆酶Elisa试剂盒降钙素受体样蛋白抗原LGR4/GPR48  G蛋白偶联受体48抗体

类黄酮Elisa试剂盒cRaf/Raf1抗原LGI4  含亮氨神经胶质瘤失活蛋白4抗体

乙烯合成酶Elisa试剂盒MEK1/MAPKK1抗体(N-端)LGI1/ETL1  富含亮氨胶质瘤失活蛋白1抗体

乙烯氧化酶Elisa试剂盒促肾上腺皮质释放因子LGALS3BP  可溶性半糖凝集素3结合蛋白抗体