实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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SHG-44细胞
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T25
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FS-X3357
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产品名称：胶质瘤细胞；SHG-44
形态特性：成纤维细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：SHG-44细胞株源自一例2-3级前沿结星细胞瘤。染色体组型显示89.2%的超三倍体。在Wistar大鼠和裸鼠中接种都能成功。细胞含有神经系统特有的S-100蛋白和星细胞特有的GFA蛋白
培养条件：RPMI1640+10%FBS
传代方法：消化CQ-5分钟。1:2。3天内可长满。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培��基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
邻乙 98%Plant hormone abscisic acid,ABA ELISA Kit 植物脱落豚鼠趋化因子样因子(CKLF)酶联吸附测定试剂盒
α,α,α-三 99%Plant Vitamin K1,VK1 ELISA Kit 植物维生素K1豚鼠生长分化因子5(GDF5)酶联吸附测定试剂盒
肉桂 97%Plant Vitamin B12,VB12 ELISA Kit 植物维生素B12豚鼠转录激活因子6(ATF6)酶联吸附测定试剂盒
丁位癸内酯 98%Plant Vitamin A,VA ELISA Kit 植物维生素A豚鼠I型前胶原羧端原肽(PICP)酶联吸附测定试剂盒
位癸内酯 98%Plant Vitamin E,VE EELISA Kit 植物维生素E豚鼠半凝集素1(GAL1)酶联吸附测定试剂盒
丁位十二内酯 98%Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit 植物维生素D2豚鼠质金属蛋白酶12(MMP-12)酶联吸附测定试剂盒
3-羟丁乙酯 98%Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit 植物维生素D3豚鼠神经营养因子受体3型(NTRK3)酶联吸附测定试剂盒
3-羟丁乙酯 97%,FGPlant Vitamin D,VD ELISA Kit 植物维生素D豚鼠周期素D3(CCND3)酶联吸附测定试剂盒
3-乙酯 98%Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 植物维生素B6豚鼠I型胶原交联氨端肽(NTXI)酶联吸附测定试剂盒
3-羟己乙酯 Kosher, ≥98%Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit 植物25羟维生素D3豚鼠扩张性共济失调突变因子(ATM)酶联吸附测定试剂盒
反-2-己烯乙酯 99%Plant Human Vitamin C,VC ELISA Kit 植物维生素C豚鼠血小板衍生生长因子受体样蛋白(PDGFRL)酶联吸附测定试剂盒
惕各乙酯 98%Alpha-bungarotoxin, Alpha-BGT ELISA Kit α-银环蛇素豚鼠糖盏蛋白(GC)酶联吸附测定试剂盒
惕各乙酯 98%，香料级Bacillus thuringiensis,BT ELISA Kit 苏云金芽孢杆蛋白豚鼠GATA结合蛋白5(GATA5)酶联吸附测定试剂盒
乙叶酯 98%Guinea pig ovalbumin specific IgG,OVA sIgG ELISA Kit 豚鼠卵清蛋白特异性IgG豚鼠纤维蛋白原降解产物(FDP)酶联吸附测定试剂盒
反式-2-己烯 97%Guinea pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 豚鼠白介素4豚鼠纤溶抑制因子(TAFI)酶联吸附测定试剂盒
SHG-44细胞总木脂素Elisa试剂盒趋化因子(C-X3-C 元)配体1抗原LEPREL2 皮屑样蛋白2抗体
鸟氨转氨酶Elisa试剂盒CX3C趋化因子受体1抗原LEO1 RNA聚合酶相关蛋白LEO1抗体
脯氨脱氢酶Elisa试剂盒周期素A抗原L-enk 亮氨脑肽抗体
△1-吡咯啉-5-羧合成酶Elisa试剂盒周期素B1抗原Legumain 半胱氨蛋白酶抗体
α-酚转运蛋白Elisa试剂盒周期素D2抗原Lefty/TGF beta 4 转化生长因子β4抗体TGF β4
羟吡啶Elisa试剂盒周期素D3抗原LEF-1 增强因子-1抗体
氨糖苷类-3-转移酶2Elisa试剂盒色素P450 3A4抗原LECT1 白衍生化学吸引素抗体
脱氢抗坏血Elisa试剂盒富半胱氨肝素结合蛋白61抗原LDOC1/BCUR1 癌症亮氨拉链下调因子1抗体
还原型抗坏血Elisa试剂盒人巨病UL23抗原LDL receptor 低密度脂蛋白受体抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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