实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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SK-N-BE(2)细胞
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T25
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FS-X3361
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产品名称：SK-N-BE(2)；神经母细胞瘤细胞
形态特性：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：1972年11月从一们多次化疗及放疗的扩散性神经母细胞瘤患儿骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神经母细胞瘤细胞株。该细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟基酶活性。有报道称SK-N-BE(2)细胞的饱和浓度超过1x106细胞/平方厘米。细胞形态多样，有的有长突触，有的呈上皮细胞样。细胞会聚集，形成团块并浮起
培养条件：MEM培养基(GIBCO,添加NaHCO31.5g/L，SodiumPyruvate0.11g/L)，45%；F-12培养基(GIBCO,添加L-glutamine300mg/L,NaHCO31.5g/L)，45%；胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度
传代方法：1:2传代
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
铍标准溶液 10μg/mlAnti-AARS2/FITC 荧光素标记氨酰tRNA合成酶2抗体IgG豚鼠前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)酶联吸附测定试剂盒
生化需氧量(BOD)标准溶液 1000μg/mlAnti-AARS2 /FITC 荧光素标记氨酰tRNA合成酶2抗体IgG豚鼠Salusin α蛋白(Salusin α)酶联吸附测定试剂盒
铜标准溶液 1000μg/mlAnti-AAT/FITC 荧光素标记α-1抗胰蛋白酶抗体IgG豚鼠载脂蛋白E(ApoE)酶联吸附测定试剂盒
铜标准溶液 1000mg/l,溶剂：1%硫Anti-AATF/FITC 荧光素标记拮抗凋亡转录因子抗体IgG豚鼠信号传导转录激活因子2(STAT2)酶联吸附测定试剂盒
铜标准溶液 500mg/l,溶剂：1%硫Anti-AATK/FITC 荧光素标记凋亡关联酪氨激酶抗体IgG豚鼠化酶(Methylase)酶联吸附测定试剂盒
铜标准溶液 100ug/mL(20degree)，体:1%HNO3Anti-BTK/ATK /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗体IgG豚鼠CD3d分子(CD3d)酶联吸附测定试剂盒
铜标准溶液 100μg/mlAnti-Phospho-Btk(Tyr223) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗体IgG豚鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)酶联吸附测定试剂盒
三价铬标准溶液 三价铬标准溶液1000μg/mlAnti-Phospho-Btk(Ser180) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠蛋白酪氨激酶ATK抗体IgG豚鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)酶联吸附测定试剂盒
钙标准溶液 1000μg/mlAnti-ABCA1/FITC 荧光素标记腺苷三结合盒转运体A1抗体IgG豚鼠趋化因子CX3C受体1(CX3XR1)酶联吸附测定试剂盒
钙标准溶液 500mg/L，溶剂：1%盐Anti-Tap1/ABCB2 /FITC 荧光素标记ATP结合转运因子1抗体IgG豚鼠CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)酶联吸附测定试剂盒
钙标准溶液 1000ug/mL，体:5%HCIAnti-ABCB5/FITC 荧光素标记ATP结合蛋白家族5抗体IgG豚鼠S100钙结合蛋白A11(S100A11)酶联吸附测定试剂盒
钙标准溶液100μg/ml,体: 5%盐Anti-ABCB6/FITC 荧光素标记ABCB6抗体IgG豚鼠纤蛋白原(FG)酶联吸附测定试剂盒
镉标准溶液 1000μg/ml，溶剂：1%硝Anti-TCTP/FITC 荧光素标记翻译控制肿瘤蛋白抗体IgG豚鼠粘蛋白7(MUC7)酶联吸附测定试剂盒
镉标准溶液 100mg/L，溶剂：1%硝Anti-Phospho-TCTP (Ser46) /FITC 荧光素标记化翻译控制肿瘤蛋白抗体IgG豚鼠钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II α(CAMK2α)酶联吸附测定试剂盒
镉标准溶液100ug/mL，体: 1%硝Anti-ABCF1/FITC 荧光素标记ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体IgG豚鼠优球蛋白(EL)酶联吸附测定试剂盒
SK-N-BE(2)细胞亚硝还原酶Elisa试剂盒转录因子E2F-4抗原LASS3 长寿相关因lASS3抗体
甘氨脱羧酶Elisa试剂盒转录因子E2F-6抗原LASS2 肿瘤转移抑制因1抗体
丝氨乙转氨酶Elisa试剂盒E2 tag多肽抗原LASS1 长寿相关因lASS1抗体
甘氨甜菜碱Elisa试剂盒胶质谷氨运载蛋白3抗原LAS2/C18orf54 肺腺瘤易感蛋白2抗体
呕吐素Elisa试剂盒EB病编码核蛋白-3large S protein 人乙肝病pre S1/S2蛋白抗体
乙酰合成酶Elisa试剂盒内皮素转化酶1抗原LARG Rho的鸟嘌呤核苷交换因子12抗体
还原态烟酰腺嘌呤二核苷Elisa试剂盒内皮素转化酶2抗原LAPTM4B 溶酶体蛋白跨膜β4抗体
氧化态烟酰腺嘌呤二核苷Elisa试剂盒嗜性粒阳离子蛋白抗原LAPTM4A 溶酶体相关膜蛋白4α抗体
GDP-L-半糖酶Elisa试剂盒外胚层发育**抗原LAP3 亮氨氨肽酶3抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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