HBVSMC细胞

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产品名称：脑微血管平滑肌细胞；HBVSMC
培养条件：平滑肌细胞培养基，scienCA-ll，货号：1101
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

镁标准溶液 1000μg/mlAnti-ADRB3/ Beta3-AR /FITC  荧光素标记肾上腺素能受体β3抗体IgG豚鼠表皮调节素(EREG)酶联吸附测定试剂盒

汞标准溶液 1000μg/mlAnti-CD8/RBITC  罗丹明标记CD8抗体IgG豚鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子(PLAU/uPA)酶联吸附测定试剂盒

汞标准溶液 100ml/L，溶剂：3%硝Anti-AD7C/FITC  荧光素标记神经丝蛋白抗体IgG豚鼠外信号调节激酶1(ERK1)酶联吸附测定试剂盒

汞标准溶液100μg/ml,体:3%硝Anti-AD7C-NTP/NTP/AF /FITC  荧光素标记神经丝蛋白抗体（人）IgG豚鼠粘蛋白2(MUC2)酶联吸附测定试剂盒

汞标准溶液10.0ng/g，体: 0.4mol/L HCL，K+2.2mg/L，Na+23mg/LAnti-AE3/FITC  荧光素标记阴离子交换蛋白3抗体IgG豚鼠丝氨蛋白酶12(PRSS12)酶联吸附测定试剂盒

钼标准溶液 1000μg/mlAnti-AEV/FITC  荧光素标记禽脑脊髓炎病抗体IgG豚鼠过氧化物酶体增殖物激活受体δ( PPAR-δ)酶联吸附测定试剂盒

钼标准溶液 500 mg/L,溶剂:微量硫Anti-AEBP1/FITC  荧光素标记脂肪增强结合蛋白1抗体IgG豚鼠神经肽Y(NPY)酶联吸附测定试剂盒

钼标准溶液 100µg/mL，体: 1%HClAnti-AF6/Afadin/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠丝状肌动蛋白结合蛋白抗体IgG豚鼠胰岛素样蛋白3(INSL3)酶联吸附测定试剂盒

铌标准溶液 1000μg/mlAnti-phospho-Afadin(Ser1718) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化丝状肌动蛋白结合蛋白抗体IgG豚鼠钙调结合蛋白(CALD)酶联吸附测定试剂盒

镍标准溶液 1000μg/mlAnti-AGER/RAGE /FITC  荧光素标记晚期糖化终末产物特异性受体抗体IgG豚鼠突触足蛋白(SYNPO)酶联吸附测定试剂盒

镍标准溶液 500mg/L，溶剂：1%硝Anti-AGEs/FITC  荧光素标记晚期糖化终末产物抗体IgG豚鼠CCAAT增强子结合蛋白ε(C/EBPε)酶联吸附测定试剂盒

镍标准溶液 100(20℃)μg/mL，体:1%HNO3Anti-AGER/RAGE/Cy3  荧光素Cy3标记晚期糖化终末产物特异性受体抗体IgG豚鼠Pirin蛋白(PIR)酶联吸附测定试剂盒

镍标准溶液 100μg/mlAnti-Aggrecan/FITC  荧光素标记软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗体IgG豚鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽B受体(CCKBR)酶联吸附测定试剂盒

亚硝盐标准溶液 1000μg/mlAnti-Aggrecan2/ADAMTS-5/FITC  荧光素标记软骨蛋白聚糖抗体IgG豚鼠血小板因子3(PF3)酶联吸附测定试剂盒

硝根离子(NO3-)标准溶液 1000μg/mlAnti-Agrin/FITC  荧光素标记聚集蛋白抗体IgG豚鼠质衍生因子2(SDF-2)酶联吸附测定试剂盒
HBVSMC细胞葡萄糖变位酶Elisa试剂盒鼠疫耶尔森氏F1荚膜蛋白(C端多肽）LALBA/alpha Lactalbumin  清蛋白α抗体

谷氨酰tRNA还原酶Elisa试剂盒脑型脂肪结合蛋白抗原LAIR-2/CD306  白相关球蛋白样受体2抗体

5-氨乙酰合成酶Elisa试剂盒Fas死亡结构域相关蛋白抗原LAIR-1/CD305  白相关球蛋白样受体1抗体

酮Elisa试剂盒粘着斑激酶抗原LAG-3/CD223  活化因-3抗体

芸苔素内酯Elisa试剂盒化粘着斑激酶抗原Lactoferrin  铁蛋白抗体

脂肪合成酶Elisa试剂盒化粘着斑激酶抗原Lactic acid bacterial protein surface  体表面蛋白抗体

乙脱氢酶Elisa试剂盒Fas活化的丝/苏氨激酶抗原LACTB2  β内酰酶样蛋白2抗体

脱氢酶Elisa试剂盒原纤维蛋白1抗原LACE1  泌升高蛋白1抗体

酮脱羧酶Elisa试剂盒纤维母生长因子4抗原KY/Kyphoscoliosis peptidase  脊柱侧后凸畸形肽酶抗体

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