T24细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：膀胱移行细胞癌细胞；T24
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：该细胞源自一位81岁白人女性患者的膀胱移行细胞癌组织；来源于移行细胞癌病人的白血病和血浆对T24和相关细胞株有细胞毒性；倍增时间为19小时；含ras(H-ras)癌基因,表达肿瘤特有抗原。

培养条件：DMEM+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
标准溶液 1000µg/mL，体:1%HClAnti-Aldolase A/FITC  荧光素标记缩酶A抗体IgG豚鼠11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 100µg/mL，体:1%HCl Anti-ALK/CD246Ag /FITC  荧光素标记间变型瘤激酶抗体IgG豚鼠粘蛋白5B(MUC5B)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 1000μg/mlAnti-phospho-ALK/CD246(Tyr1586) /FITC  荧光素标记兔抗人、大鼠化间变型瘤激酶抗体IgG豚鼠滑行蛋白α(TXLNa)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 500mg/L，溶剂：水Anti-ALK/CD246(phospho Tyr1278/1282/1283) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化间变型瘤激酶抗体IgG豚鼠甘露糖受体(MR)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液 体: 1％HClAnti-ALK/CD246(phospho Tyr1604) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化间变型瘤激酶抗体IgG豚鼠封闭蛋白3(CLDN3)酶联吸附测定试剂盒

镨标准溶液 1000μg/mlAnti-ALR/FITC  荧光素标记肝再生增强因子抗体IgG豚鼠血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)酶联吸附测定试剂盒

镨标准溶液 1000μg/mL，体：10%HClAnti-ALT1/GPT 1/FITC  荧光素标记谷氨氨转移酶1抗体IgG豚鼠5核苷酶(5-NT)酶联吸附测定试剂盒  

酚标准溶液 1000μg/mlAnti-AMACR/P504S /FITC  荧光素标记α－酰辅酶A消旋酶抗体IgG豚鼠白调节素(LR)酶联吸附测定试剂盒

根标准溶液 1000μg/mlAnti-HADHSC (human)/FITC  荧光素标记短链L-3羟烷辅酶A脱氢酶抗体（人）IgG豚鼠S100钙结合蛋白A9(S100A9)酶联吸附测定试剂盒

钌标准溶液 1000μg/mlAnti-HADHSC (rat, mouse)/FITC  荧光素标记短链L-3羟烷辅酶A脱氢酶抗体（大鼠，小鼠）IgG豚鼠α羟丁脱氢酶(αHBDH)酶联吸附测定试剂盒

铑标准溶液 1000μg/mlAnti-Amph/FITC  荧光素标记神经元突触前膜蛋白抗体IgG豚鼠髓系触发受体-1(TREM-1)酶联吸附测定试剂盒

铷标准溶液 1000μg/mlAnti-AMPK alpha-1 /FITC  荧光素标记腺苷单活化蛋白激酶α1抗体IgG豚鼠血小板反应蛋白2(TSP-2)酶联吸附测定试剂盒

铼标准溶液 1000μg/mlAnti-AMPK alpha 2/FITC   荧光素标记兔抗人、大、小鼠腺苷单活化蛋白激酶α2抗体IgG豚鼠上皮膜抗原(EMA)酶联吸附测定试剂盒  

二氧化硅标准溶液 1000μg/mlAnti-AMPK alpha-1(phospho Ser485+Ser491) /FITC  荧光素标记化腺苷单活化蛋白激酶α1抗体IgG豚鼠内皮蛋白C受体(EPCR)酶联吸附测定试剂盒

钠标准溶液 1000μg/mlAnti-AMPK beta-1(phospho Ser108) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化腺苷单活化蛋白激酶β1抗体IgG豚鼠长效状腺(LATS)酶联吸附测定试剂盒
T24细胞肉桂脱氢酶Elisa试剂盒促卵泡受体抗原KRAS  原癌因K-ras抗体

纤维素Elisa试剂盒促卵泡抗原KNTC1/Kinetochore  着丝点关联蛋白1抗体

1,5-二核酮糖Elisa试剂盒γ1氨丁A型受体α1抗原KNL2/C14orf106  14号染色体开放阅读框106抗体

生长释放肽Elisa试剂盒g-氨丁B1受体(多肽)KNDC1  脑蛋白9抗体

螯合肽Elisa试剂盒γ1氨丁A型受体B2抗原KMT8/Riz1/Riz2  转录因子GATA3结合蛋白G3B抗体

金属忍耐蛋白Elisa试剂盒谷氨脱羧酶-67抗原KMT6/EZH2  抑癌蛋白EZH2抗体

类粘蛋白Elisa试剂盒生长抑制DNA损伤因153抗原KMT3B/NSD1/ARA267  组蛋白化KMT3B抗体（雄受体激活蛋白）

亚硫还原酶Elisa试剂盒化神经生长相关蛋白43抗原KMT1C/G9a  组蛋白H3赖氨9化1C抗体

腺苷-5-酰硫还原酶Elisa试剂盒3-甘油脱氢酶(人)抗原KMT1A/SUV39H1  组蛋白H3 K9转移酶抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。