HaCaT细胞

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产品名称：永生化表皮细胞；HaCaT
形态特性：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

特征特性：该细胞源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性。

培养条件：DMEM+10%FBS

传代方法：1:3～1:6传代，每周换液2～3次
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

水质锂标样 分析标准品Anti-Caspase-3 p17 subunit/FITC  荧光素标记Caspase-3 p17 subunit蛋白抗体鸡胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联吸附测定试剂盒

铅标准溶液 1000mg/L，溶剂：1%硝Anti-caspase-3 p12 subunit /FITC  荧光素标记活化半胱蛋白酶蛋白-3抗体IgG鸡抗脂酰丝氨抗体(APSA)酶联吸附测定试剂盒  

铅标准溶液 500mg/L，溶剂：1%硝Anti-Cystatin 3/CST3/FITC  荧光素标记胱抑素C/半胱氨蛋白酶抑制剂C抗体IgG鸡大肠癌专一抗原3(CCSA-3)酶联吸附测定试剂盒

锰标准溶液 1000mg/L，溶剂：1%硝Anti-Caspase-6 (CT)/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-6抗体（C端）IgG鸡外质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN/CD147)酶联吸附测定试剂盒

锰标准溶液 500mg/L，溶剂：1%硝Anti-Caspase-6 (NT)/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-6抗体(N端)IgG鸡粒趋化蛋白2(GCP-2)酶联吸附测定试剂盒

水质锰标样 1.96mg/L in H2O，分析标准品Anti-Caspase-6 (NT)/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-6抗体(N端)IgG鸡平滑肌肌动蛋白α2(ACTα2)酶联吸附测定试剂盒

水质钼标样 分析标准品Anti-CASP4/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-4抗体IgG鸡促胃液素受体(GasR)酶联吸附测定试剂盒

镁标准溶液0.197mg/L,用于水质分析Anti-Caspase-8 /FITC  荧光素标记半胱氨蛋白酶8抗体IgG鸡二氢硫辛转乙酰酶(DLAT)酶联吸附测定试剂盒

镁标准溶液 500mg/L,溶剂：1%盐Anti-FLASH/CASP8AP2/FITC  荧光素标记半胱氨蛋白酶8相关蛋白2抗体IgG鸡热休克蛋白40(HSP-40)酶联吸附测定试剂盒

中标样 分析标准品Anti-Caspase-9/FITC  荧光素标记白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG鸡I型前胶原羧端原肽(PICP)酶联吸附测定试剂盒

标准溶液500μg/ml，溶剂：Anti-Caspase-9/FITC  荧光素标记白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG鸡信号传导转录激活因子2(STAT2)酶联吸附测定试剂盒

水质汞标样 浓度范围:6.14±0.42(ug/L)，分析标准品 Anti-Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体IgG鸡上皮膜抗原(EMA)酶联吸附测定试剂盒  

汞标准溶液 100ml/L，溶剂：3%硝Anti-Caspase-10/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶-10抗体IgG鸡周期素依赖性激酶2(CDK2)酶联吸附测定试剂盒

钼标准溶液 500 mg/L,溶剂:微量硫Anti-Caspase-12(hunman)/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-12抗体(人)IgG鸡转运蛋白1(TNPO1)酶联吸附测定试剂盒

汞标准溶液 10μg/ml，溶剂：Anti-Caspase-12/FITC  荧光素标记半胱蛋白酶蛋白-12抗体IgG鸡周期素依赖性激酶9(CDK-9)酶联吸附测定试剂盒
HaCaT细胞色氨合成酶Elisa试剂盒抑制素βB抗原KATNA1/Katanin p60 A1  剑蛋白p60亚A1抗体

羧肽酶Elisa试剂盒整合素α3抗原katanin p80  剑蛋白p80抗体

植酶Elisa试剂盒整合素β5抗原KAT4  周期因1蛋白抗体

过氧化氢Elisa试剂盒整合素α1抗原KAT3B/Ep300  转录接头蛋白EP300抗体

精合成酶Elisa试剂盒整合素α4β7抗原KAT2B/ GCN5/PCAF  组蛋白乙酰转移酶PCAF抗体

精氨脱羧酶Elisa试剂盒整合素αE2抗原KAT13D/CLOCK  生物钟KAT13D蛋白抗体

鸟氨脱羧酶Elisa试剂盒ENPP3抗原KAT13A/SRC1  类固受体激活蛋白1抗体

S-腺苷蛋氨脱羧酶Elisa试剂盒支架蛋白抗原KARS2/Lysyl tRNA synthetase  赖氨tRNA的连接酶抗体

糖异构酶Elisa试剂盒干扰素调节因子抗原Kappa-casein/CSN3  κ-酪蛋白抗体

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