实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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PCS-3细胞
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T25
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FS-X3390
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产品名称：前列腺癌细胞；PCS-3
形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长,在软琼脂中成簇生长，并可悬浮生长
特征特性：PCS-3源于一位62岁白人男性IV级前列腺腺癌患者的骨转移灶；有低水平的酸性磷酸酶活性和5-α-睾酮还原酶活性。
培养条件：F12K+10%FBS
传代方法：消化CQ-5分钟，1:2,3天内可长满
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
氧化铝 99．99%，镀膜Anti-CD44/PE 荧光素PE标记CD44抗体IgG鸡富含半胱氨蛋白61(Cyr61)酶联吸附测定试剂盒
氧化铝G TLCAnti-CD45/PE 荧光素PE标记兔抗人、小鼠CD45抗体IgG鸡胃粘液素(GM)酶联吸附测定试剂盒
二氢铵 CP，98.5%Anti-CD133/Biotin 生物素化造血干抗原CD133抗体鸡白分化抗原28(CD28)酶联吸附测定试剂盒
氢二铵 CP,98.0%Anti-CD55/DAF/FITC 荧光素标记衰变加速因子CD55抗体IgG鸡状旁腺受体2(PTHR2)酶联吸附测定试剂盒
氟化钡 99.9% metals basisAnti-CD56/FITC 荧光素标记CD56抗体IgG鸡重组激活因1(RAG-1)酶联吸附测定试剂盒
氟化钡 AR,99.0%Anti-CD56/NCAM1/FITC 荧光素标记神经粘附分子1抗体IgG鸡双肾上腺皮质(DCX)酶联吸附测定试剂盒
氟化钡 99.99% metals basis,10μmAnti-CD57/FITC 荧光素标记抗CD57抗体IgG鸡晶体蛋白(CLC)酶联吸附测定试剂盒
氟化钡 99.999% metals basisAnti-CD58/LFA-3/FITC 荧光素标记功能相关抗原-3抗体IgG鸡前列腺特异性抗原(PSA/KLK3)酶联吸附测定试剂盒
氢锶 荧光级，99%Anti-CD59/FITC 荧光素标记反应性溶血膜抑制蛋白抗体IgG鸡嗜铬蛋白A/胰抑制素(CgA/Pancreastatin)酶联吸附测定试剂盒
氢锶 99.98% metals basisAnti-CD62L/FITC 荧光素标记L选择素抗体IgG鸡解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)酶联吸附测定试剂盒
硫亚铜 99%Anti-CD63/MLA1 /FITC 荧光素标记抗溶酶体膜糖蛋白抗体IgG鸡外质蛋白1(ECM1)酶联吸附测定试剂盒
硫 CP,98%Anti-CD63/MLA1 /RBITC 红色荧光素罗丹明(RBITC)标记抗溶酶体膜糖蛋白抗体IgG鸡表面膜球蛋白D(mIgD)酶联吸附测定试剂盒
硫钠 AR，98.5%Anti-CD66a/Cea-1/CEACAM1/FITC 荧光素标记癌胚抗原相关粘附分子1抗体IgG鸡VI型胶原(COL6)酶联吸附测定试剂盒
无水化铝 CP,≥99.0%Anti-CD67/CEAcam8/FITC 荧光素标记整合素样癌胚抗原相关粘附分子8抗体IgG鸡骨骼肌慢肌肌钙蛋白T(TNNT1)酶联吸附测定试剂盒
丁酮肟 99%Anti-CD68/FITC 荧光素标记CD68抗体IgG鸡胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酶(CAD)酶联吸附测定试剂盒
PCS-3细胞铁氧原蛋白Elisa试剂盒质金属蛋白酶-9抗原IQCG IQCG蛋白抗体
异戊二烯合成酶Elisa试剂盒质金属蛋白酶-10抗原IQCF1 IQCF1蛋白抗体
单萜烯合成酶Elisa试剂盒髓过氧化物酶抗原IQCE IQCE蛋白抗体
脂酰丝氨合酶1Elisa试剂盒多药耐药相关蛋白2IQCD IQCD蛋白抗体
脂酰丝氨Elisa试剂盒多药耐药相关蛋白5抗原IQCC IQCC蛋白抗体
葫芦二烯合酶Elisa试剂盒线粒体核糖体蛋白L28(抗原)IQCA1 IQCA1蛋白抗体
脂肪酶Elisa试剂盒错配修复蛋白1抗原Involucrin 囊包蛋白/内披蛋白抗体
木葡聚糖内糖转酶水解酶Elisa试剂盒胃粘液素抗原INTS3 集成复杂蛋白亚单位3抗体
糖原合成激酶Elisa试剂盒褪黑素受体1B抗原Intra Acrosomal Protein/SP10 顶端体蛋白10抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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