DU145细胞

产品名称：前列腺癌细胞；DU145
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：DU145是从一位有3年细胞白血病史的前列腺癌患者的脑部转移灶中建立的。该细胞系未检测到敏感性，酸性磷酸酶阳性，单个的细胞可在软琼脂中形成集落。对此细胞和原始肿瘤的亚显微结构分析可见微绒毛、微丝、细胞桥粒、线粒体、发达的高尔基体和异质溶酶体。该细胞不表达前列腺抗原。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1:3传代，2-3天换液一次

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

啉 ACS, ≥99.0%Anti-CD105/Endoglin/TGF- Beta receptor /RBITC  红色荧光素罗丹明(RBITC)标记CD105/转化生长因子β受体抗体IgG鸡糖原合成酶激酶3α(GSK3α)酶联吸附测定试剂盒

啉 分析标准品，≥99.5% (GC)Anti-CD107a/LAMP-1/FITC  荧光素标记溶酶体相关膜蛋白1抗体IgG鸡颗粒体蛋白(GRN)酶联吸附测定试剂盒

啉 CP,98%Anti-CD107a/LAMP-1/PE  荧光素PE标记溶酶体相关膜蛋白1抗体IgG鸡腺苷环化酶3(ADCY3)酶联吸附测定试剂盒

啉 AR,99%Anti-nectin 2/CD112/FITC  荧光素标记黏附分子CD112抗体IgG鸡烟酰腺嘌呤二核苷氧化酶4(NOX4)酶联吸附测定试剂盒

啉 Standard for GC，≥99.5% (GC)Anti-CD117/FITC  荧光素标记CD117抗体IgG鸡谷胱甘肽S转移酶α5(GSTα5)酶联吸附测定试剂盒

聚乙烯1797型 解度：96.0～98.0%(mol/mol)Anti-CD133 Anti-gen/FITC  荧光素标记造血干抗原CD133抗体IgG鸡白介素2受体β(IL-2Rβ)酶联吸附测定试剂盒

聚乙烯1788低粘度型 解度：87.0～89.0(mol/mol)，CPS：4.6-5Anti-OX40/CD134/TNFRSF4/FITC  荧光素标记CD134抗体IgG鸡白介素16(IL-16)酶联吸附测定试剂盒

烯酰 AR,99.0%Anti-IL-7Ra/CD127/PE   荧光素PE标记兔抗人、大、小鼠、马、兔白介素-7受体a抗体IgG鸡球蛋白M(IgM)酶联吸附测定试剂盒

烯酰 98% Anti-CD137/TNFRSF9/FITC  荧光素标记CD137抗体IgG鸡功能相关抗原2(LFA-2/CD2)酶联吸附测定试剂盒

N-羟烯酰 98%Anti-CD133 antigen/PE  荧光素藻红蛋白标记兔抗人、大、小鼠和果蝇CD133抗体IgG鸡嗜铬蛋白B(CgB)酶联吸附测定试剂盒  

对二 99%Anti-HVEM/TNFRSF14/FITC  荧光素标记肿瘤坏死因子受体超家族成员14抗体IgG鸡胎盘碱性酶(PLAP/ALPP)酶联吸附测定试剂盒

三 97%Anti-Syndecan-1/CD138/FITC  荧光素标记多配体聚糖抗体IgG鸡Apelin 36(AP36)酶联吸附测定试剂盒

三乙二 75℃＋＋＋Anti-CD141/FITC  荧光素标记凝血调节蛋白抗体IgG鸡蕈碱型乙酰胆碱受体亚型M2(M-AChRM2)酶联吸附测定试剂盒

三乙二 CPAnti-VE-cadherin/CD144/VECD/FITC  荧光素标记上皮型钙粘附分子/血管内皮钙粘蛋白抗体IgG鸡球蛋白G3(IgG3)酶联吸附测定试剂盒

三乙二 99%Anti-CD146(MCAN)/FITC  荧光素标记抗黑色素瘤粘付分子CD146抗体IgG鸡TATA框结合蛋白/TBP相关因子(TAF)酶联吸附测定试剂盒
DU145细胞脂肪去饱和酶2Elisa试剂盒纳曲酮偶联牛血清白蛋白：纳曲酮偶联血蓝蛋白Integrin alpha V/CD51  整合素αV抗体

L-谷氨Elisa试剂盒核小体组装蛋白1（多肽）Integrin Alpha V + Beta1  整合素αVβ1抗体

奎宁肉桂羟化转移酶Elisa试剂盒N-钙粘附分子抗原Integrin Alpha V + Beta 6  整合素αVβ6抗体

还原型谷胱甘肽酶Elisa试剂盒E-钙粘附分子抗原Integrin Alpha V + Beta 5  整合素αVβ5抗体

脱羧酶Elisa试剂盒去氧肾上腺素Integrin Alpha V + Beta 3 (CD51+CD61)  整合素αVβ3抗体

淀粉脱支酶Elisa试剂盒神经粘蛋白抗原Integrin Alpha V  整合素αV抗体

半胱氨蛋白酶Elisa试剂盒2型神经纤维瘤抗原Integrin alpha L/CD11a  整合素αL抗体

a_1,4葡聚糖转移酶Elisa试剂盒活化T核因子1蛋白Integrin alpha E2  整合素alpha E2 抗体

色素氧化酶Elisa试剂盒化核因子/化k因结合核因子抗原Integrin alpha E/CD103  整合素αE抗体