实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个;
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台;
产品名称
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规格
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货号
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RWPE-2细胞
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T25
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FS-X3396
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产品名称:正常前列腺上皮细胞;RWPE-2
形态特性:上皮细胞
生长特性:贴壁生长
培养条件:KM培养基
传代方法:1:3传代,2-3天传一代。
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冻存培养基:
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
钨 99.95%,12μmAnti-CDK9/FITC 荧光素标记周期素依赖性激酶9抗体IgG鸡血清淀粉样蛋白A2(SAA2)酶联吸附测定试剂盒
钨粉 9.95%,<1.1μmAnti-Phospho-CDK9 (Thr186) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化周期素依赖性激酶9抗体IgG鸡质衍生因子2(SDF-2)酶联吸附测定试剂盒
钨丝 99.95%,1mm 直径Anti-CD133/RBITC 红色荧光素罗丹明 (RBITC)标记兔抗人、大、小鼠和果蝇CD133抗体IgG鸡γ谷氨酰半胱氨合成酶(γ-ECS)酶联吸附测定试剂盒
钨标准溶液 1000μg/mlAnti-CD46/RBITC 红色荧光素罗丹明(RBITC)标记CD46膜辅蛋白抗体IgG鸡戊糖素(PTD)酶联吸附测定试剂盒
钨 3.5≤d<5.0,99.95%Anti-Cdkn1c/p57/Kip2 /FITC 荧光素标记周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体IgG鸡黑色素瘤关联ME20 (ME20M)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.95%,0.5mm 直径Anti-Phospho-p57 Kip2 (Thr310)/FITC 荧光素标记化周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体IgG鸡状旁腺(PTH)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.95%,0.25mm 直径Anti-CDX2/FITC 荧光素标记尾型同源盒转录因子2抗体IgG鸡骨成型蛋白15(BMP-15)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.95%,1mm 直径Anti-CEA /FITC 荧光素标记癌胚抗原抗体IgG鸡腺苷脱氨酶(ADA)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.95%,0.1mm 直径Anti-CEBP- Alpha /CLEBP Alpha /FITC 荧光素标记转录调节因子C/EBP α 抗体IgG鸡抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)酶联吸附测定试剂盒
钨 9.95%,50μm Anti-Phospho-C/EBPbeta (Ser105) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠转录调节因子C/EBP β抗体IgG鸡锌结合α2-糖蛋白1(αZGP1)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.95%,12μmAnti-Phospho-C/EBPalpha (Ser21) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化转录调节因子C/EBP α 抗体IgG鸡胸腺非依赖性抗原(TI-Ag)酶联吸附测定试剂盒
钨粉 99.98% metals basis,1-5μmAnti-Phospho-C/EBPalpha (Thr222/226) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化转录调节因子C/EBP α 抗体IgG鸡成纤维生长因子受体3(FGFR3)酶联吸附测定试剂盒
钨粉 9.95%,<1.1μmAnti-C/EBP Beta/FITC 荧光素标记转录调节因子C/EBP β抗体IgG鸡趋化因子CCL3样蛋白1(CCL3L1)酶联吸附测定试剂盒
钨 比表面积10-15m2/g,粒度20nm-100nm,99.9%Anti-Phospho-C/EBPbeta (Thr235) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠转录调节因子C/EBP β抗体IgG鸡前列腺素F2α(PGF2α)酶联吸附测定试剂盒
钨 99.99% metals basisAnti-PBK/TOPK/FITC 荧光素标记PDZ连接激酶/T-LAK源蛋白激酶抗体IgG鸡丝氨蛋白酶(PRSS)酶联吸附测定试剂盒
RWPE-2细胞藻红蛋白Elisa试剂盒胚胎干关键蛋白抗原Inhibin beta A/Activin A 抑制素βA抗体 Inhibin βA
藻蓝蛋白Elisa试剂盒鸟氨脱羧酶抗原Inhibin Alpha 抑制素α抗体 Inhibin α
苹果Elisa试剂盒小肠结肠炎耶尔森氏膜通道蛋白抗原ING1/p33 生长抑制因子因1抗体
双酚AElisa试剂盒嗅球蛋白1多肽抗原Influenza A virus (Duck) 鸭流感病抗体
α-淀粉酶Elisa试剂盒增食欲素-A/欲A抗原INCA1 INCA1蛋白抗体
脱落合成酶Elisa试剂盒缩宫素受体Importin4/RanBP4 核蛋白4抗体(Ran结合蛋白4)
生长素合成酶Elisa试剂盒食欲素受体(多肽)Importin 9/RanBP9 核蛋白9抗体(Ran结合蛋白M)
脂酶DElisa试剂盒增殖潜能相关蛋白抗原IMPDH2 5'肌苷脱氢酶2抗体
长链脂肪Elisa试剂盒p19ARF抑癌因抗原IMPDH1 肌苷单脱氢酶1抗体
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。