BT-549细胞

产品名称：乳腺导管癌细胞；BT-549
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：该细胞1978年由W.G.Coutinho和E.Y.Lasfargues建系，源自一位72岁患有乳腺导管癌的白人女性，来源组织包括及浸润导管。该细胞形态包括上皮样细胞及多核巨细胞，可分泌一种粘性物质。

培养条件：RPMI1640+10%FBS+0.023IU/mlinsulin

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细��所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

琥珀二酯 AR，99%Anti-A Raf/ARAF/FITC  荧光素标记A-Raf抗体IgG鸡红藻氨离子型谷氨受体2(GRIK2)酶联吸附测定试剂盒

二乙二丁醋酯 98%Anti-Phospho-A Raf (Ser299) /FITC  荧光素标记化A-Raf抗体IgG鸡酪氨激酶2(Tyk-2)酶联吸附测定试剂盒

二异丁酮 异构体混合物，97%Anti-Phospho-A Raf (Tyr301/302) /FITC  荧光素标记化A-Raf抗体IgG鸡载脂蛋白M(ApoM)酶联吸附测定试剂盒  

正己烷 AR，97%Anti-JAM1/CD321/FITC  荧光素标记连接粘附分子1抗体IgG鸡泛素结合酶E2A(UBE2A)酶联吸附测定试剂盒  

异丁异丁酯 98%Anti-cRaf/Raf1(c-raf 1) /FITC  荧光素标记抗cRaf/Raf1抗体IgG鸡嗜性白血球相关之RNA水解酵素家族成员1(EAR1)酶联吸附测定试剂盒

环己烷 Standard for GC, ≥99.8% (GC)Anti-CREB-1/FITC  荧光素标记环腺苷应答元件结合蛋白抗体IgG鸡核糖体蛋白L10(RPL10)酶联吸附测定试剂盒

环己烷 99%Anti-P-CREB-1/FITC  荧光素标记化环腺苷应答元件结合蛋白抗体IgG鸡Preptin 蛋白(Preptin)酶联吸附测定试剂盒

环己烷 for HPLC,≥99%Anti-C-REL/FITC  荧光素标记衍生C-型凝集素抗体IgG鸡B瘤因子10(Bcl-10)酶联吸附测定试剂盒

环己烷  光谱级,≥99%Anti-CRF/FITC  荧光素标记促肾上腺皮质释放因子IgG鸡骨成型蛋白2 (BMP-2)酶联吸附测定试剂盒

异丁(MIBC)  99%Anti-CRF/CRH /FITC  荧光素标记促肾上腺皮质释放因子抗体IgG鸡松弛素/胰岛素样肽受体1(RXFP1)酶联吸附测定试剂盒

异丁酰乙酯 98%Anti-CRHR1/CRFR1/FITC  荧光素标记促肾上腺皮质释放受体1抗体IgG鸡Persephin蛋白(PSPN)酶联吸附测定试剂盒

异丁酮  for HPLC, ≥99.5%Anti-CRHR2/CRFR2/FITC  荧光素标记促肾上腺皮质释放受体2抗体IgG鸡间隙连接蛋白40(CX40)酶联吸附测定试剂盒

异丁酮 ACS, ≥98.5%Anti-Cripto-1/FITC  荧光素标记表皮生长因子相关肽抗体IgG鸡N-乙酰β-D-氨葡萄糖苷酶(NAGase)酶联吸附测定试剂盒

氨酯 99%Anti-Cripto-1/FITC  荧光素标记畸胎瘤衍化生长因子抗体(表皮生长因子相关肽)C端IgG鸡睫状神经营养因子(CNTF)酶联吸附测定试剂盒

异戊 ACS，98.5%Anti-CRLR/CALCRL/FITC  荧光素标记降钙素受体样蛋白抗体IgG鸡活化蛋白C(APC)酶联吸附测定试剂盒
BT-549细胞二氢类黄酮还原酶Elisa试剂盒环指蛋白148抗原IL-19/NG.1  白介素-19抗体

过氧化还原酶5Elisa试剂盒Rho相关蛋白激酶1抗原IL-18R Beta/IL1R7/CD218b  白介素-18受体β链抗体

组蛋白Elisa试剂盒Rho相关蛋白激酶2抗原IL-18R alpha/CD218a  白介素-18受体α链抗体

ACC合成酶Elisa试剂盒核受体RXRα抗原IL18BP  白介素18结合蛋白抗体

ACC氧化酶Elisa试剂盒6-山梨脱氢酶抗原IL-18/IGIF  白介素-18/干扰素γ诱导因子抗体

β-葡萄糖苷酶Elisa试剂盒S100B蛋白抗原IL-17RD  白介素17受体D抗体

吲哚丁Elisa试剂盒S100B蛋白多肽IL-17RC/IL-17RL  白介素17受体C抗体

糖酶Elisa试剂盒钙结合蛋白S100A1抗原IL-17RB  白介素-17B受体抗体

顺式还原酮加双氧酶1Elisa试剂盒核质结合区结合蛋白1抗原IL-17R/IL-17RA/CD217  白介素17受体抗体