MDA-MB-231细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：乳腺癌细胞;MDA-MB-231
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：MDA-MB-231来自患有转移乳腺腺癌的51岁女病人的胸水。在裸鼠和ALS处理的BALB/c小鼠中，它能形成低分化腺癌（III级）。

培养条件：L15+10%FBS

传代方法：消化CQ-5分钟，1:2,3天内可长满

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
九种TVOCs混合标准品10μg/ml,溶剂:Anti-CXC-R2/FITC  荧光素标记表面趋化因子受体2抗体IgG鸡谷胱甘肽S转移酶(GSTs)酶联吸附测定试剂盒

九种TVOCs混合标准品100μg/ml,溶剂:Anti-CXCR3/CD183/FITC  荧光素标记表面趋化因子受体3抗体/G蛋白偶联受体IgG鸡血管内皮生长因子(VEGF)酶联吸附测定试剂盒

九种TVOCs混合标准品1000μg/ml,溶剂:Anti-CXCR3/CD183(rat,mo) /FITC  荧光素标记兔抗大、小鼠表面趋化因子受体3抗体IgG鸡血小板激活因子(PAF)酶联吸附测定试剂盒

2,4,5-涕  分析标准品Anti-CXCR5/CD185/FITC  荧光素标记表面趋化因子受体5抗体IgG鸡球蛋白E Fc段受体I(FcεR I)酶联吸附测定试剂盒

化镧,无水 99.9% (REO),10目Anti-CXCR6/FITC  荧光素标记表面趋化因子受体6抗体IgG鸡半凝集素9(GAL9)酶联吸附测定试剂盒

氧化铽 99.99% metals basisAnti-CXCR7/RDC1/FITC  荧光素标记表面趋化因子受体7抗体IgG鸡载脂蛋白A4(ApoA4)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 AR,99.0%Anti-CXorf36/FITC  荧光素标记脱羧酶蛋白体36抗体IgG鸡丝裂原激活蛋白激酶激酶1(MAP2K1)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 分析标准品Anti-CXorf36/FITC  荧光素标记脱羧酶蛋白体36抗体IgG鸡Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 USPAnti-Cyclin A/FITC  荧光素标记周期素A抗体IgG鸡B激活抗原B7-2(LAB7-2/CD86)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 和昆虫培养级Anti-Cyclin B1/FITC  荧光素标记周期素B1抗体IgG鸡对氧酶3(PON3)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 植物培养级Anti-Phospho-Cyclin B1 (Ser147) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化周期素B1抗体IgG鸡粒巨噬集落激因子抗体(GM-CSF Ab)酶联吸附测定试剂盒

氟化氢铵 99.99% metals basisAnti-Phospho-Cyclin B1 (Ser133) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化周期素B1抗体IgG鸡氨端前心钠肽(NT-ProANP)酶联吸附测定试剂盒

盐硫 AR,99.0%Anti-Cyclin C/FITC  荧光素标记周期素C抗体IgG鸡突触核蛋白α(SNCα)酶联吸附测定试剂盒

环己二氧硅烷 97%Anti-Cyclin D1/FITC  荧光素标记周期素D1蛋白抗体鸡保护素(CD59)酶联吸附测定试剂盒

一二乙铝 1.1M solution in tolueneAnti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化cyclin D1抗体IgG鸡巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α)酶联吸附测定试剂盒
MDA-MB-231细胞纤维蛋白酶Elisa试剂盒因子信号传导抑制蛋白3抗原IL-1 Alpha  白介素1α/IL-1α抗体

氨合成酶Elisa试剂盒超氧化物歧化酶1抗原IKZF3  锌指蛋白Aiolos抗体

黄质脱氢酶Elisa试剂盒超氧化物歧化酶2抗原IKKα(Phospho-Thr23)  化KB抑制蛋白激酶α抗体

酮脱氢酶Elisa试剂盒生长抑素抗原IKK gamma/IKBKG  KB抑制蛋白激酶γ抗体

苹果脱氢酶Elisa试剂盒胚胎干关键蛋白IKK beta/IKB  KB抑制蛋白激酶β抗体

苹果合酶Elisa试剂盒SP1转录生长因子抗原IKK alpha/IkappaB kinase  KB抑制蛋白激酶α抗体

乙脱氢酶Elisa试剂盒富含半胱氨的性蛋白抗原IKK alpha + IKK beta  KB抑制蛋白激酶α/β抗体

硫氨Elisa试剂盒血清应答因子抗原IKIP  IKK激酶相互作用蛋白抗体

G蛋白Elisa试剂盒固调节元件结合蛋白1抗原IKI3 family protein  拟南芥IKI3抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。