实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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MDA-kb2细胞
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T25
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FS-X3414
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产品名称：正常乳腺细胞；MDA-kb2
生长特性：贴壁生长
培养条件：L15+10%FBS
传代方法：1：2传代
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
罗丹明123 99%Anti-Desmin/FITC 荧光素标记结蛋白抗体IgG鸡芳硫酯酶B(ASB)酶联吸附测定试剂盒
草二乙酯 AR，99%Anti-DHAV/FITC 鸭型肝炎A病抗体IgG鸡胰蛋白酶原II(Try2)酶联吸附测定试剂盒
草二乙酯 CP，98%Anti-DIO2/FITC 荧光素标记脱酶2抗体IgG鸡胆固酯转移蛋白(CETP)酶联吸附测定试剂盒
草二乙酯 分析标准品，≥99.7% (GC)Anti-DISC1(CT)/FITC 荧光素标记DISC1 C端抗体IgG鸡视黄诱导因/RIG-1样受体(RLR)酶联吸附测定试剂盒
化烯钯(II)二聚物 Pd 58.2%Anti-DISC1(NT)/FITC 荧光素标记DISC1 N端抗体IgG鸡调节正常T表达和因子(RANTES)酶联吸附测定试剂盒
(1R,2S)-1-氨-2-茚 98%Anti-DJ-1/FITC 荧光素标记丝裂原依赖性癌因蛋白抗体IgG鸡雄诱导蛋白1(AIG1)酶联吸附测定试剂盒
(+)-2,2'-亚双[(3aR,8aS)-3a,8a-二氢-8H-茚[1,2-d]并恶唑 Anti-DKK1/FITC 荧光素标记抑癌蛋白DKK1抗体IgG鸡胃脂酶 (LIPF)酶联吸附测定试剂盒
(1S,2R)-(-)-1-氨-2-茚 99%Anti-DKK3/FITC 荧光素标记抑癌蛋白DKK3抗体IgG鸡半凝集素7(GAL7)酶联吸附测定试剂盒
(1,5-环辛二烯)2,4-戊二酮铑(I) 99%Anti-KMT6/EZH2/FITC 荧光素标记抑癌蛋白EZH2抗体IgG鸡畸胎瘤衍生生长因子1(TDGF1)酶联吸附测定试剂盒
乙酰酮(降二烯)合铑 97%Anti-DLK1/FITC 荧光素标记穿膜蛋白DLK1抗体IgG鸡蛋白激酶C-ζ(PKCζ)酶联吸附测定试剂盒
乙酰酮酰双(亚乙)化铑 99%Anti-DLX4/FITC 荧光素标记兔抗DLX4抗体IgG鸡外信号调节激酶2(ERK2)酶联吸附测定试剂盒
二羰乙酰酮铑 99%Anti-DMBT1 /FITC 荧光素标记抑癌因抗体IgG鸡核孔蛋白205kda(NUP205)酶联吸附测定试剂盒
三膦醋钯 Pd 14.2%Anti-DMT1/FITC 荧光素标记金属离子转运体1抗体IgG鸡蛋白酶(PP)酶联吸附测定试剂盒
1,4-双(二膦丁烷)二化钯 98%Anti-Dnmt1/FITC 荧光素标记DNA转移酶1抗体IgG鸡胰岛素自身抗体(IAA)酶联吸附测定试剂盒
双(乙)化钯(II) Pd 41.0%Anti-Dnmt3a/FITC 荧光素标记DNA转移酶-3α抗体IgG鸡转运蛋白2(TNPO2)酶联吸附测定试剂盒
MDA-kb2细胞布鲁东氏酪氨激酶Elisa试剂盒端粒体复制结合因子1抗原IFNAR1 干扰素α受体抗体
铜锌超氧化物歧化酶Elisa试剂盒TRIM32抗原IFN-Alpha/IFNA1/IFNA13/Interferon alpha 1 干扰素α抗体
L-天冬氨氧化酶Elisa试剂盒原肌球蛋白抗原IFN-Alpha 2b/Interferon alpha 2/INFA2 干扰素α2b抗体
交替氧化酶Elisa试剂盒生精凋亡相关因4抗原IFNA4/IFNA76/IFNA M1 干扰素α4抗体
脱氢酶Elisa试剂盒CIDEB抗原IFNA21/IFNA F 干扰素α21抗体
V型ATP酶Elisa试剂盒Tsg101抗原IFNA17/Interferon alpha 17/IFNA88 干扰素α17抗体
脱氧核糖核酶Elisa试剂盒促状腺素受体抗原IFNA16/Interferon alpha 16 干扰素α16抗体
透明质酶Elisa试剂盒自噬微管相关蛋白轻链3抗原IFNA11/Limitin/Interferon alpha 11 干扰素α11抗体
固氮酶Elisa试剂盒肺癌肿瘤阻抑因1抗原IFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C 干扰素α10抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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