HBL-100细胞

产品名称：整合SV40基因的乳腺上皮细胞；HBL-100
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：该细胞由E.V.Gaffney及其同事从一位没有乳癌家族史的供者乳汁中建立，培养出来的细胞染色体组型在第7代时就不正常；电镜照片显示有微丝、张力原纤维和桥粒；Southern转移表明有整合型SV40病毒基因，不可以当作正常细胞。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

(R)-1,1′-联萘-2,2′-二酰 95%Anti-E.coli O6 (Escherichia coli O6)/Biotin  生物素化兔抗大肠埃希杆O6抗体IgG鸡核有丝分裂器蛋白1(NUMA1)酶联吸附测定试剂盒

1,3-二(2,6-二异)化咪唑 97%Anti-EPEC/E.coli /Gold  胶体金离子标记抗肠致病性大肠杆抗体IgG鸡球蛋白E Fc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)酶联吸附测定试剂盒

1,3-双(2,6-二异)-4,5-二氢咪唑四氟盐 97%Anti-EPEC-O6/Gold  胶体金离子标记大肠埃希杆O6抗体IgG鸡MAX二聚化蛋白1(mxd1)酶联吸附测定试剂盒

1,3-双(2,4,6-)-4,5-二氢咪唑鎓四氟盐 95%Anti-E.coli O139/Biotin  生物素标记抗志贺素大肠杆O139抗体IgG鸡泛素关联蛋白2 (UBAP2)酶联吸附测定试剂盒

1,3-二(2,4,6-三)化咪唑 95%Anti-E.coli O139/Gold  胶体金离子标记抗志贺素大肠杆O139抗体IgG鸡酮脱氢酶α(PDHα)酶联吸附测定试剂盒

1,3-双(2,6-二异)咪唑啉酮-2-亚 98%Anti-E.coli O157/Gold  胶体金离子标记抗大肠埃希氏O157抗体IgG鸡FMS样酪氨激酶3配体(Flt3L)酶联吸附测定试剂盒

1,3-二均咪唑-2-亚 97%Anti-E.coli O157/Biotin  生物素标记抗大肠埃希氏O157抗体IgG鸡生长分化因子6(GDF6)酶联吸附测定试剂盒

1,3 -双( 2,4,6 -)化咪唑鎓 98%Anti-Dysferlin/FITC  荧光素标记Dysferlin蛋白抗体IgG鸡状腺结合球蛋白(TBG)酶联吸附测定试剂盒

(R,R)-2,6-双(4--2-恶唑啉-2-)吡啶 98%Anti-EPEC/E.coli /Biotin   生物素化兔抗肠致病性大肠杆抗体IgG鸡果糖二缩酶A(ALDOA)酶联吸附测定试剂盒

(S,S)-2,6-双(4--2-恶唑啉-2-)吡啶 98%Anti-E.coli/Biotin   生物素化兔抗普通大肠埃希体蛋白抗体IgG鸡血清/糖皮质调节激酶2(SGK2)酶联吸附测定试剂盒

(R,R)-2,6-双(4-异-2-恶唑啉-2-)吡啶 99%Anti-E2F1/FITC  荧光素标记转录因子E2F-1抗体IgG鸡抗脂抗体(APA)酶联吸附测定试剂盒

(S)-(+)-联萘酚酯 97%Anti-E2F2/FITC  荧光素标记转录因子E2F-2抗体IgG鸡性别决定区Y框蛋白3(SOX3)酶联吸附测定试剂盒

(S,S)-(+)-N,N′-双(3,5-二-叔丁亚水杨)-1,2-环已二 98%Anti-E2F3/FITC  荧光素标记转录因子E2F-3抗体IgG鸡抗肌动蛋白抗体(AAA)酶联吸附测定试剂盒

(R,R)-(−)-N,N′-双(3,5-二叔丁亚水杨)-1,2-环已二 Anti-E2F4/FITC  荧光素标记转录因子E2F-4抗体IgG鸡通用转录因子II B(GTF2B)酶联吸附测定试剂盒

二钌(II)二聚体  97%Anti-E2F5/FITC  荧光素标记转录因子E2F-5抗体IgG鸡胞浆型脂酶A2(cPLA2)酶联吸附测定试剂盒
HBL-100细胞I型胶原蛋白Elisa试剂盒血管内皮粘附分子抗原IFABP  小肠型脂肪结合蛋白抗体

4-氨丁转氨酶Elisa试剂盒电压依赖性阴离子通道抗原IFABP  小肠型脂肪结合蛋白抗体

α氨Elisa试剂盒血管内皮生长因子(多肽抗原)IEX1/Differentiation dependent gene 2 protein  分化相关因2蛋白/立即早期反应蛋白抗体

油菜甾Elisa试剂盒血管内皮生长因子A抗原IDI1  异戊烯焦1抗体

油菜烷Elisa试剂盒血管内皮生长因子C型抗原IDH3A  草酰琥珀脱羧酶α抗体

饱和脂肪Elisa试剂盒血管内皮生长因子受体2IDH2  草酰琥珀脱羧酶抗体

不饱和脂肪Elisa试剂盒可溶性血管内皮生长因子受体2IDH1/Isocitrate dehydrogenase  异柠檬脱氢酶1抗体

3-O-转移酶Elisa试剂盒血管内皮生长因子受体-3（多肽）IDE  胰岛素降解酶抗体

阿魏-5-羟化酶Elisa试剂盒血管内皮生长因子受体-3抗原IDE  胰岛素降解酶抗体