ECA109，EC109细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

产品名称：食管癌细胞；ECA109
形态特性：上皮样

生长特性：贴壁生长

特征特性：1973年建系，来自人食管中段鳞癌组织，小块法原代培养建系。BALB/c裸鼠移植成瘤。

培养条件：RPMI1640+10%FBS

传代方法：1：2传代

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
二对膦 96%Anti-E.coli DH-5 Alpha /HRP  辣根过氧化物酶标记抗DH5α大肠杆体蛋白抗体IgG鸡乌头酶1(ACO1)酶联吸附测定试剂盒

二异膦 10 wt.% solution in hexanesAnti-E.coli O139/HRP  辣根过氧化物酶标记抗志贺素大肠杆O139抗体IgG鸡骨碱性酶(BALP)酶联吸附测定试剂盒

二叔丁膦 10 wt.% solution in hexanesAnti-E.coli O157/HRP  辣根过氧化物酶标记抗大肠埃希氏O157抗体IgG鸡纤连蛋白富亮氨跨膜蛋白2(FLRT2)酶联吸附测定试剂盒

2 - 二叔丁膦-2'，4'，6' -三异联 97%Anti-EPEC/E.coli /HRP  辣根过氧化物酶标记抗肠致病性大肠杆抗体IgG鸡髓过氧化物酶抗体(Anti-MPO)酶联吸附测定试剂盒

2-双环己膦-2 '-联 98%Anti-EPEC/E.coli/HRP  辣根过氧化物酶标记抗普通大肠埃希体蛋白抗体IgG鸡载脂蛋白F(ApoF)酶联吸附测定试剂盒

2-双环已膦-2 ',6'-二异氧联 98%Anti-E.coli/EPEC/FITC  荧光素标记抗普通大肠埃希体蛋白抗体IgG鸡状腺过氧化物酶(TPO)酶联吸附测定试剂盒

2 - 二膦-2' - （N组，n -二） - 联 97%Anti-E.coli O6 (Escherichia coli O6)/FITC  荧光素标记大肠埃希杆O6抗体IgG鸡球蛋白G Fc段受体II(FcγR II/CD32)酶联吸附测定试剂盒

正丁二(1-金刚烷)膦 97%Anti-E.coli O139/FITC  荧光素标记抗志贺素大肠杆O139抗体IgG鸡胰蛋白酶原激活肽(TAP)酶联吸附测定试剂盒

二(1-金刚烷)膦 97%Anti-E.coli O157/FITC  荧光素标记抗大肠埃希氏O157抗体IgG鸡可溶性血纤蛋白单体复合物(sFMC)酶联吸附测定试剂盒

(1R,2R)-(+)-1,2-环己二L-盐 98%Anti-EPEC/E.coli /FITC  荧光素标记兔抗肠致病性大肠杆抗体IgG鸡因子信号转导抑制因子3(SOCS3)酶联吸附测定试剂盒

D-叔亮氨 98%Anti-EphA1 R/FITC  荧光素标记抗EphA1-R受体抗体IgG鸡酪氨蛋白激酶受体A2(EphA2)酶联吸附测定试剂盒

2-(二-叔丁膦)-2'-联 98%Anti-EphA2 R/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠酪氨蛋白激酶受体A2抗体IgG鸡凝血因子Ⅶ(F7)酶联吸附测定试剂盒  

1,3-二异咪唑 97%Anti-Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠化酪氨蛋白激酶A2受体抗体IgG鸡黏病耐药蛋白1(MX1)酶联吸附测定试剂盒

(1,5-环辛二烯)化钌, 聚合物 95%Anti-EphA4 R/FITC  荧光素标记酪氨蛋白激酶受体A4抗体IgG鸡载脂蛋白E(ApoE)酶联吸附测定试剂盒

二(五环戊二烯)合钌(III)聚合物 98%Anti-EphA4/FITC  荧光素标记抗酪氨蛋白激酶A4抗体IgG鸡血管内皮抑素抗体(ES-Ab)酶联吸附测定试剂盒  
ECA109，EC109细胞ataxin-3抗体Elisa试剂盒血小板内皮黏附分子-1（抗原）human C3  补体C3抗体

过氧化物酶Elisa试剂盒CD34(多肽抗原)HtrA2/Omi  线粒体丝氨蛋白酶抗体

果糖-1,6-二缩酶Elisa试剂盒神经粘附分子1(抗原)HSTF2/HSF2  热休克转录因子2抗体

果糖-1,6-二缩酶Elisa试剂盒癌胚抗原相关粘附分子8HSPβ7/cvHSP  热休克蛋白β7抗体

景天庚酮糖-1,7-二酶Elisa试剂盒CD68抗原HSPC117/C22orf28  22号染色体开放阅读框28抗体

β-碳酐酶Elisa试剂盒干生长因子受体/表面分化抗原（抗原）HSPBAP1  热休克蛋白27相关蛋白1抗体

β-樱草糖苷酶Elisa试剂盒造血干抗原（多肽抗原）HSPB7/cvHSP  热休克蛋白β7抗体

Δ12-脂肪去饱和酶Elisa试剂盒CD147(抗原)HSPB2  热休克蛋白B2抗体

β-酮脂酰ACP合成酶Elisa试剂盒CD169抗原HSPA6  热休克蛋白70家族蛋白6抗体
细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。