实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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Caki-1细胞
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T25
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FS-X3426
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产品名称：肾透明细胞癌；Caki-1
形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长
特征特性：该细胞超微结构中包含许多微绒毛、少许微丝、许多小线粒体、发达的高尔基休和内质网、许多脂滴和多层体、次级溶酶体，没有发现病毒颗粒。
培养条件：McCoy＇s5AMedia+10%FBS
传代方法：1:2~1:4传代；每周换液2~3次。
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细��的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
六正丁二锡 98%Anti-FPRL1 /FITC 荧光素标记脂氧素受体1抗体IgG鸡接触蛋白4(CNTN4)酶联吸附测定试剂盒
六 98%Anti-Fractalkine/CX3CL1 /FITC 荧光素标记神经趋化蛋白抗体IgG鸡促肾上腺皮质(ACTH)酶联吸附测定试剂盒
芬达唑 分析标准品Anti-Phospho-FRA1 (Ser265) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化FRA-1蛋白抗体IgG鸡II A组脂酶A2(PLA2G2A)酶联吸附测定试剂盒
芬达唑 98%Anti-FSCN1/FITC 荧光素标记纤维束蛋白同源物1/肌动蛋白集束蛋白/圆线虫紫癜 抗体IgG鸡S100钙结合蛋白A12(S100A12 )酶联吸附测定试剂盒
托品 98%Anti-FSH/FITC 荧光素标记促卵泡抗体IgG鸡糖皮质受体β(GRβ)酶联吸附测定试剂盒
刚果红 ARAnti-FSH-R/FITC 荧光素标记促卵泡受体抗体IgG鸡Smad同源物3 (Smad3/MADH3)酶联吸附测定试剂盒
刚果红 ACSAnti-FSP/Spastin/FITC 荧光素标记抗纤维母表面抗原抗体IgG鸡中性粒弹性蛋白酶(NE/ELA2)酶联吸附测定试剂盒
硫链霉素 720 I.U./mgAnti-FST/FITC 荧光素标记抗卵泡抑素抗体IgG鸡8-异构前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)酶联吸附测定试剂盒
泰洛星 效价potency: ≥800 units/mg tylosinAnti-F1 operon positive regulatory protein(NT)/FITC 荧光素标记鼠疫耶尔森氏F1荚膜蛋白抗体（N端）IgG鸡嗜环蛋白/亲环素D(CYPD)酶联吸附测定试剂盒
磺异噁唑 分析标准品Anti-F1 operon positive regulatory protein(CT)/FITC 荧光素标记鼠疫耶尔森氏F1荚膜蛋白抗体（C端）IgG鸡纤维连接素相关抗原(FRA)酶联吸附测定试剂盒
磺异恶唑 99%Anti-Gab1/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠接头蛋白Gab 1抗体IgG鸡II D组脂酶A2(PLA2G2D)酶联吸附测定试剂盒
(R)-(+)-2,2'-二(二-3,5-膦)-1,1'-联萘 98%Anti-Gab2/FITC 荧光素标记接头蛋白Gab 2抗体IgG鸡肺表面活性物质相关蛋白B(SPB)酶联吸附测定试剂盒
1-Boc-单哌 98%Anti-Phospho-Gab1 (Tyr627) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化接头蛋白Gab 1抗体IgG鸡肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(TNFRSF1A)酶联吸附测定试剂盒
N-Boc-4-氨-4-羧 98%Anti-Phospho-Gab1 (Tyr659) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化接头蛋白Gab 1抗体IgG鸡二氢嘧啶酶样2(DPYSL2)酶联吸附测定试剂盒
4-溴吡唑 99%Anti-GABA-AR Alpha1/FITC 荧光素标记γ1氨丁受体α1抗体IgG鸡可溶性因子受体(sCKR)酶联吸附测定试剂盒
Caki-1细胞草莓潜隐环斑病Elisa试剂盒人类疱疹病8抗原HPV18 E6 monoclonal 人类状瘤病18 E6单克隆抗体
番茄环斑病Elisa试剂盒缺氧诱导因子1α 多肽HPV18 E6 人类状瘤病18 E6抗体
环斑病Elisa试剂盒组蛋白H3样蛋白多肽HPV16-E7 人类状瘤病16-E7抗体
花叶病Elisa试剂盒组蛋白H3样蛋白（C端多肽）HPV16-E7 人类状瘤病16-E7抗体
肌苷Elisa试剂盒组蛋白H3样蛋白（N端多肽）HPV16-E6 人类状瘤病16抗体
P选择素Elisa试剂盒艾滋病病-1/人类缺陷病1型(抗原)HPV16 L2 人瘤病16型L2抗体
莽草脱氢酶Elisa试剂盒艾滋病病-1/人类缺陷病1型(抗原)HPV16 E7 protein 人瘤病16型E7抗体
酪氨解氨酶Elisa试剂盒麻疹病红血球凝集素蛋白多肽HPV16 E6 + HPV18 E6 人类状瘤病16/18 E6抗体
甘油激酶Elisa试剂盒麻疹病红血球凝集素蛋白多肽Hpt/Haptoglobin 结合珠蛋白/触珠蛋白抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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