实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个;
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台;
产品名称
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规格
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货号
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SCCS-4细胞
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T25
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FS-X3432
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产品名称:类鳞状上皮舌癌细胞;SCCS-4
形态特性:上皮样
生长特性:贴壁生长
培养条件:DMEM/F12+10%FBS
传代方法:1:2传代
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冻存培养基:
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1)细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基,其所含胎牛血清和牛血清比例经过优,可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2)冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基,含10% DMSO,适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
肌 99%Anti-GRB10/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠生长因子受体结合蛋白10抗体IgG鸡多形核白弹性蛋白酶(PMN Elastase)酶联吸附测定试剂盒
2-溴酯 99%Anti-Phospho-GRB10 (Tyr67) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化生长因子受体结合蛋白10抗体IgG鸡生长分化因子7(GDF7)酶联吸附测定试剂盒
2- 99%Anti-GrB(Granzyme B)(AA 18-29)/FITC 荧光素标记颗粒酶B抗体IgG鸡钙网蛋白(CRT)酶联吸附测定试剂盒
对 AR,99.0%Anti-gremlin/FITC 荧光素标记骨形态形成蛋白拮抗蛋白抗体IgG鸡黑素转铁蛋白(MFI2)酶联吸附测定试剂盒
邻二 98%Anti-GRGDS/FITC 荧光素标记抗粘附多肽抗体IgG鸡泛素分解酶(DUB)酶联吸附测定试剂盒
双乙钠 99%Anti-GRO Alpha/FITC 荧光素标记兔抗生长调节致癌因α抗体IgG鸡脑多巴神经营养因子(CDNF)酶联吸附测定试剂盒
甜菊苷 分析标准品,≥98% (HPLC), 固体Anti-GRK1/FITC 荧光素标记G蛋白偶合受体激酶1抗体IgG鸡球蛋白E Fc段受体II(FcεR II)酶联吸附测定试剂盒
3-(异酰氧)氧硅烷 97%Anti-GRK2/FITC 荧光素标记G蛋白偶合受体激酶2抗体IgG鸡β淀粉样前体蛋白(βAPP)酶联吸附测定试剂盒
三乙硅烷 99%Anti-GRO Beta/FITC 荧光素标记兔抗生长调节致癌因β抗体IgG鸡嗜中性粒防御素α1(DEFα1)酶联吸附测定试剂盒
异三乙氧硅烷 95%Anti-GRM1/FITC 荧光素标记代谢型谷氨受体1抗体IgG鸡成骨生长肽(OGP)酶联吸附测定试剂盒
氧硅烷 97%Anti-GRM2/FITC 荧光素标记代谢型谷氨受体2IgG鸡低分子肝素(LMWH)酶联吸附测定试剂盒
三硅烷 99%Anti-CD11a/FITC 荧光素标记整合素-αM抗体IgG鸡尾型同源盒转录因子(CDX2)酶联吸附测定试剂盒
氧硅烷 85%Anti-Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr869/873/876) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化GRM2蛋白抗体IgG鸡血小板亲和蛋白1(PKP1)酶联吸附测定试剂盒
三乙氧硅烷 98%Anti-Phospho-GRM2/GLUR2 (Tyr876) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠化GRM2蛋白抗体IgG鸡斑型POZ蛋白(SPOP)酶联吸附测定试剂盒
7-喹哪啶 99%Anti-GRM2+GRM4/FITC 荧光素标记促代谢型谷氨受体2+4抗体IgG鸡胆固(CH)酶联吸附测定试剂盒
SCCS-4细胞氨转移酶Elisa试剂盒核小体结合蛋白1(抗原)HMGB4 高迁移率族蛋白B4抗体
1-脱氧木酮糖-5-合成酶Elisa试剂盒神经丝蛋白(抗原)HMGB1 高迁移率族蛋白B1抗体
牻牛儿焦合酶Elisa试剂盒阴离子转运蛋白-1(人源)HMGA2 高迁移率族蛋白A2抗体
1-脱氧-D-木酮糖-5-还原异构酶Elisa试剂盒阴离子转运蛋白-1(大、小鼠同源:人源见bs-0606P)HMGA1/HMG-I/HMG-Y 高迁移率族蛋白A1抗体
4-羟-3-丁-2-烯二还原酶Elisa试剂盒阴离子转运蛋白-3(抗原)HMG14/HMGN1 高迁移率核小体结合蛋白1
谷氨合成酶Elisa试剂盒半糖凝集素9(抗原)HMBS/PBGD 卟胆原脱氨酶抗体
ω-2脂肪脱氢酶Elisa试剂盒胚胎干关键蛋白(多肽)HLX1 同源异型盒因HLX1蛋白抗体
玉米赤霉烯酮Elisa试剂盒骨桥蛋白(抗原)HLTF 解旋酶样转录因子抗体
脱氧雪腐镰孢烯Elisa试剂盒抑癌因p16(抗原)HLC8/Lung cancer related protein 8 肺癌相关蛋白8抗体
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。