实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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293T细胞
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T25
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FS-X3438
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产品名称：胚肾细胞；293T
形态特性：上皮样
生长特性：贴壁生长
特征特性：293细胞株插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。
培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS
传代方法：1：2传代
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
3-溴噻吩 97%Anti-HER3/ErbB3 /FITC 荧光素标记HER3受体抗体IgG鸡血凝素(HA)酶联吸附测定试剂盒
2-代苄硫 98%Anti-HER3/ErbB3/PE 荧光素PE标记HER3受体抗体IgG鸡烯式酮羧激酶1(PCK1)酶联吸附测定试剂盒
4-苄硫 98%Anti-HERG/FITC 荧光素标记特异性离子通道蛋白抗体IgG鸡着丝粒蛋白F(CENPF)酶联吸附测定试剂盒
硫 95%Anti-HEV/FITC 荧光素标记戊型肝炎病抗体IgG鸡血管**素受体Tie1(ANG-R-Tie1)酶联吸附测定试剂盒
3-茴香硫 97%Anti-Melamine/Gold 金标记抗三聚抗体IgG(10及15nm)鸡脂肪合酶(FASN)酶联吸附测定试剂盒
3--5-并噻吩 97%Anti-Melamine/Gold 胶体金离子标记三聚单克隆抗体IgG鸡内皮型一氧化氮合成酶(NOS3/eNOS)酶联吸附测定试剂盒
3,5-二硫酚 97%Anti-HGV/FITC 荧光素标记庚型肝炎病抗体IgG鸡α2纤溶酶抑制因子(α2-PI)酶联吸附测定试剂盒
2,4-二硫酚 95%Anti-hHb/FITC 荧光素标记小鼠抗人血红蛋白单克隆抗体IgG鸡角蛋白18(CK-18/KRT18)酶联吸附测定试剂盒
2,5-二硫酚 98%Anti-HHV4/EBV/FITC 荧光素标记人类疱疹病4抗体IgG鸡蛋白S(PROS)酶联吸附测定试剂盒
2,5-二氧硫酚 98%Anti-HHV8/ORF K2/vIL-6/FITC 荧光素标记人类疱疹病8抗体IgG鸡酮激酶M2型同工酶(PKM2)酶联吸附测定试剂盒
3，5-二硫酚 97%Anti-HHV8/ORF50/FITC 荧光素标记人类疱疹病8抗体IgG鸡状旁腺相关蛋白(PTHrP)酶联吸附测定试剂盒
2,2'-二氨二硫 98%Anti-HHV8/ORF50/FITC 荧光素标记人类疱疹病8抗体IgG鸡蛋白激酶C-ε(PKCε)酶联吸附测定试剂盒
2,3-二噻吩 97%Anti-HHV8/ORF50/FITC 荧光素标记人类疱疹病8抗体IgG鸡唾液(SA)酶联吸附测定试剂盒
2,5-二噻吩-3-磺酰 97%Anti-HHV8/ORF K2/FITC 荧光素标记人类疱疹病8抗体IgG鸡L氨解氨酶(PAL)酶联吸附测定试剂盒
二并噻吩 99%Anti-HIF-1 Alpha/FITC 荧光素标记缺氧诱导因子1α 抗体IgG鸡糖盏蛋白(GC)酶联吸附测定试剂盒
293T细胞鲨烯-2，3-环氧化物Elisa试剂盒血管粘附蛋白1（多肽抗原）HIP4/CBS 丝氨羧半胱氨合成酶抗体
O-乙酰丝氨硫水解酶Elisa试剂盒波形蛋白（抗原）HIP2 泛素蛋白连接酶E2抗体
T4多聚核苷激酶Elisa试剂盒VSIG4 T负调节蛋白之一（抗原）HIP1R/HIP12/HIP3 亨丁顿舞蹈症相互作用蛋白12抗体
脂氧合酶Elisa试剂盒一种新的丝氨/苏氨激酶家族成员的因WNK4（多肽抗原）HINT1 组氨三聚体核苷结合蛋白1抗体
色素P450氧化还原酶Elisa试剂盒锌指蛋白300(抗原)HIG1/HIGD1A 缺氧诱导因1蛋白抗体
色素P450氧化还原酶Elisa试剂盒锌指脂蛋白-1a(抗原)HIFPH4 缺氧诱导因子脯氨酰4羟化酶抗体
酰转移酶Elisa试剂盒锌指脂蛋白-1b(抗原）HIF3 alpha 缺氧诱导因子3α/HIF-3α抗体
烟酰腺嘌呤二核苷;还原型辅酶ⅡElisa试剂盒人锌指脂蛋白-1c(抗原)HIF-1β/ARNT1 缺氧诱导因子1β 抗体
牻牛儿焦Elisa试剂盒干扰素-γ多肽抗原（大、小鼠）HIF-1 Alpha 缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1α
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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