MDCK(NBL-2)细胞

产品名称：马-达二氏犬肾细胞系；MDCK(NBL-2)
形态特性：上皮样；多角

生长特性：贴壁生长

特征特性：1958年，MadinSH和DarbyNB从表观正常的成年雌性科克猎犬的肾建立了MDCK细胞株。角蛋白阳性。该细胞曾被用于研究β淀粉前体蛋白的形成及其蛋白水解产物的分类

培养条件：DMEM(高糖）+10%FBS

传代方法：1:2~1:6传代；2~3天换液1次。

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冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使��何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台；

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

2-并噻唑 98%Anti-Phospho-Histone H3 (Ser28) /FITC  荧光素标记化组蛋白3抗体IgG鸡成纤维生长因子结合蛋白1(FGFBP1)酶联吸附测定试剂盒

4-氧硫代酰 98%Anti-Phospho-Histone H3 (Thr11)/FITC  荧光素标记化组蛋白3抗体IgG鸡球蛋白G2(IgG2)酶联吸附测定试剂盒

3-氧酚 97%Anti-Phospho-Histone H3 (Thr3)/FITC  荧光素标记化组蛋白3抗体IgG鸡和肽素(CPP)酶联吸附测定试剂盒

2-硝二硫 98%Anti-Histone H1.4 (phospho Thr18) /FITC  荧光素标记抗化乙酰化组蛋白H1b抗体IgG鸡胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)酶联吸附测定试剂盒

2-噻吩乙酰 98%Anti-HisX6/FITC  荧光素标记聚组氨抗体/抗His tag标签抗体IgG鸡III型胶原α1(COL3α1)酶联吸附测定试剂盒

乙烯硫 98%Anti-HIV gp41/FITC  荧光素标记艾滋病病抗体IgG鸡胱天蛋白酶14(CASP14)酶联吸附测定试剂盒

二二硫 99%Anti-HIV gp120/FITC  荧光素标记艾滋病病抗体IgG鸡SH2携带蛋白(SHC/SLP-76)酶联吸附测定试剂盒

S-硫代乙酯 98%Anti-HIV-1 ENV (gp160) antigen/FITC  荧光素标记艾滋病病-1包膜糖蛋白抗体IgG鸡受蛋白(PLN)酶联吸附测定试剂盒

噻蒽 98%Anti-HIV-1 ENV (gp160) antigen/FITC  荧光素标记艾滋病病-1包膜糖蛋白抗体IgG鸡可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)酶联吸附测定试剂盒

4,4'-硫代双硫酚 98%Anti-HisX6/6His/His tag(CT) /FITC  荧光素标记聚组氨抗体/抗His tag（C端）标签抗体IgG鸡葡萄糖激酶(GCK)酶联吸附测定试剂盒

硫代水杨 99%Anti-HisX6/6His/His tag(CT)/HRP  辣根过氧化物酶标记聚组氨抗体/抗His tag标签抗体（C端）IgG鸡前列腺素F(PGF)酶联吸附测定试剂盒

2,2'-硫代二乙 98%Anti-HLA-DR/FITC  荧光素标记HLA-DR抗原抗体IgG鸡血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)酶联吸附测定试剂盒

4,4'-二亚砜  97%Anti-HLA-E/FITC  荧光素标记人类白抗原EIgG鸡表皮调节素(EREG)酶联吸附测定试剂盒

硫 99%Anti-HLA-G/FITC  荧光素标记人类白抗原G/组织相容性白抗原G抗体IgG鸡T急性母白血病相关抗原(TALLA-1/CD231)酶联吸附测定试剂盒

对硫酚 99%Anti-HMGA1/FITC  荧光素标记高迁移率族蛋白A1抗体IgG鸡成纤维生长因子7(FGF7/KGF)酶联吸附测定试剂盒
MDCK(NBL-2)细胞甘露糖变位酶2Elisa试剂盒促肾上腺皮质(1-39)HHV4/CMV  人类巨病抗体

K+-ATPaseElisa试剂盒脂联素（多肽抗原）HHLA2  HHLA2蛋白抗体

线粒体解偶联蛋白Elisa试剂盒乙酰辅酶A羧化酶HHEX/HMPH  同源盒蛋白PRH抗体

Snrk蛋白激酶家族成员2Elisa试剂盒碱性酶hHBrk1  微丝相关蛋白hHBrk1抗体

羟戊二单酰辅酶A还原酶Elisa试剂盒α1性糖蛋白1/类粘蛋白1hHb(H5A3)  人血红蛋白单克隆抗体

螯合素Elisa试剂盒水通道蛋白-5抗原HGFA/HGF activator  肝生长因子激活蛋白抗体

果糖-1,6-二缩酶Elisa试剂盒糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽HGF  肝生长因子抗体

木葡聚糖转移酶水解酶Elisa试剂盒β淀粉样肽25-35/Aβ25-35/Amyloid β (25-35) (多肽)HFREP1/FGL1  肝源性纤维蛋白原相关蛋白1抗体

芳烃羟化酶Elisa试剂盒β淀粉样肽 1-42 (C端多肽)HEY2  转录因子HEY2蛋白抗体