实验材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块；
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；
8、酒精灯1台；
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产品名称
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规格
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货号
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Hs746T细胞
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T25
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FS-X3462
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产品名称：胃癌细胞；Hs746T
形态特性：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
特征特性：HS-746T细胞1973年建系（NavalbioscienCA-slaboratory）。该细胞系的细胞大小，形状及核状态均会在培养过程中发生变化。由于细胞的恶性化，染色多为亚三倍体（46%）。
培养条件：DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)10%FBS(GIBCO)
传代方法：1:3传代,2-3天传一代
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冻存培养基：
冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。
1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
氧化镧 99.9% metals basisAnti-LH/FITC 荧光素标记抗人促黄体**素抗体IgG鸡水通道蛋白2(AQP-2)酶联吸附测定试剂盒
氧化镧 99.99%Anti-LH/FITC 荧光素标记抗人促黄体**素抗体IgG鸡P选择素(SELP)酶联吸附测定试剂盒
氟化锂 AR,99%Anti-LH/FITC 荧光素标记小鼠抗人促黄体**素单克隆抗体IgG鸡α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)酶联吸附测定试剂盒
氟化锂 SP,光谱纯anti-LH/CG Receptor/FITC 荧光素标记人促黄体**素受体抗体IgG鸡脂酶B(PLB)酶联吸附测定试剂盒
氟化锂 99.99% metals basisAnti-LH/Biotin 生物素标记抗人促黄体**素抗体IgG鸡唾液结合球蛋白样凝集素12(SIGLEC12)酶联吸附测定试剂盒
氟化锂 CP,98.5%Anti-L-HDC /FITC 荧光素标记L-组氨脱羧酶抗体IgG鸡神经型一氧化氮合酶(NOS1/nNOS)酶联吸附测定试剂盒
氟化锂 99.9% metals basisAnti-LHRH/GNRH /FITC 荧光素标记黄体释放抗体/促性腺释放抗体IgG鸡胰高血糖素(GC)酶联吸附测定试剂盒
氧化镥 99.99% metals basisAnti-LI-cadherin/FITC 荧光素标记肝肠钙粘连蛋白抗体IgG鸡组织蛋白酶K(CTSK)酶联吸附测定试剂盒
金属锂粒 99.9% metals basisAnti-LIF /FITC 荧光素标记兔抗白血病抑制因子抗体IgG鸡V型胶原α2(COL5α2)酶联吸附测定试剂盒
金属锂棒 99.9% metals basis，棒Anti-LIFR/FITC 荧光素标记抗白血病抑制因子受体抗体IgG鸡可溶性腺苷环化酶(sAC)酶联吸附测定试剂盒
水质锂标样 分析标准品Anti-LIMK1 /FITC 荧光素标记单丝氨蛋白激酶1抗体IgG鸡凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)酶联吸附测定试剂盒
锂 低钠级，99.95% metals basisAnti-Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505) /FITC 荧光素标记化单丝氨蛋白激酶1/2抗体IgG鸡白介素1α(IL-1α)酶联吸附测定试剂盒
金属锂 电池级，99.9% metals basisAnti-Lingo-1/FITC 荧光素标记Nogo受体作用蛋白抗体IgG鸡α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)酶联吸附测定试剂盒
锂 高钠级，98.5%Anti-LIR-6/CD85i/LILRA1/FITC 荧光素标记白球蛋白样受体6抗体IgG鸡11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)酶联吸附测定试剂盒
碲化铅 99.99%Anti-LILRB3/CD85a/PirB/FITC 荧光素标记白球蛋白样受体-B抗体IgG鸡CD163分子(CD163)酶联吸附测定试剂盒
Hs746T细胞半胱氨蛋白酶抑制剂;胱抑素CElisa试剂盒荧光素标记牛IgMgremlin 骨形态形成蛋白拮抗蛋白抗体
天冬氨蛋白酶抑制剂Elisa试剂盒荧光素标记鸡IgGGREB1 癌雌调控蛋白GREB1抗体
S1核酶Elisa试剂盒荧光素标记鸡IgMGRB2/ASH 生长因子受体结合蛋白2抗体
刀豆素AElisa试剂盒荧光素标记狗IgGGRB10 生长因子受体结合蛋白10抗体
雌二Elisa试剂盒荧光素标记狗IgMGRASP65 高尔体外周膜蛋白p65抗体
孕酮Elisa试剂盒荧光素FITC标记羊IgG(流式同型对照)GRAP2 生长因子受体结合蛋白2相关接头蛋白2抗体
环腺苷二核糖Elisa试剂盒荧光素标记羊IgMGranzyme K 颗粒酶K抗体
脱镁叶绿素a氧化酶Elisa试剂盒荧光素标记豚鼠IgGGranzyme D/B/E/N/G/F/H 颗粒酶D/B/E/N/G/F/H抗体
谷氨转氨酶Elisa试剂盒荧光素标记豚鼠IgMGRAMD3/NS3TP2 型肝炎病-NS3反转录激活蛋白2抗体
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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